在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域,，多色熒光免疫組化(mIHC)和多色流式(FCM)是兩種重要的技術(shù),，它們在檢測和分析生物樣本方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。盡管它們都涉及到熒光標(biāo)記和多色分析,，但它們的原理,、樣本選擇、應(yīng)用和優(yōu)勢卻有著明顯的區(qū)別,。本文將為您詳細解析這兩種技術(shù)的不同之處,。
原理與特點
多色熒光免疫組化技術(shù)(mIHC)，也稱為酪氨酸信號放大(TSA)技術(shù),，是一種基于酪胺信號放大的多重順次免疫染色技術(shù),。這項技術(shù)利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白或核酸進行高密度原位標(biāo)記，允許同時檢測單個細胞或組織樣本上的多個目標(biāo)靶點,。mIHC技術(shù)的優(yōu)勢在于其原位展示和定量分析的雙重能力,，能夠全面研究細胞組成、功能和細胞間相互作用,。
多色流式技術(shù),，即流式細胞術(shù)(FCM)，是一項集激光技術(shù),、光電測量技術(shù),、計算機技術(shù)、流體力學(xué)以及細胞免疫熒光化學(xué)技術(shù),、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技細胞分析技術(shù),。FCM通過激光光源激發(fā)細胞上所標(biāo)記的熒光物質(zhì)的強度和顏色以及散射光的強度，對粒子進行多參數(shù)分析,，包括粒子形狀和大小,、細胞周期、細胞內(nèi)細胞因子,、細菌表面抗原,、細胞DNA內(nèi)含物等,。
樣本要求
多色熒光免疫組化技術(shù)(mIHC)樣本要求：
1、樣本類型：mIHC通常使用福爾馬林固定的蠟塊或玻片,，包括大塊組織或組織芯片(TMA),。
2、組織固定：組織應(yīng)使用10%中性福爾馬林/多聚甲醛固定,，正常固定時間為18-24h,。
3、切片厚度：切片厚度約為4微米,，使用防脫玻片,。
4、樣本保存：盡量選擇相對較新的樣本（一個月內(nèi)）,，最長不要超過半年,，以免靶點缺失或強非特異性導(dǎo)致染色效果不佳。
5,、組織處理：取新鮮組織后迅速轉(zhuǎn)移到固定液中,，固定后浸蠟溫度應(yīng)控制在58~60℃左右。
6,、玻片要求：組織需要緊貼玻片,，避免褶皺，玻片不能有破損,、劃傷或污漬。
多色流式(FCM)樣本要求：
1,、樣本類型：FCM需要單細胞懸液,。外周血或懸浮生長的細胞可以直接制備成單細胞懸液，而貼壁細胞,、實體組織或腫瘤組織需要先制備成單細胞懸液,。
2、細胞活性：FCM檢測的樣本需要是活細胞,，尤其是經(jīng)過長時間運輸和儲存的樣本,，死細胞對許多抗體有非特異性染色，因此細胞活性檢測非常重要,。
3,、樣本保存：理想狀態(tài)下，樣本應(yīng)在采集后立刻進行處理和染色,。不同類型的抗凝劑對應(yīng)的保存時間不同,，例如肝素抗凝的血和骨髓可保存至48-72h/室溫。
4,、紅細胞去除：在進行FCM分析前,，可能需要去除紅細胞,，常用的方法包括紅細胞裂解法和密度梯度離心法。
5,、細胞與抗體比例：需要根據(jù)不同樣本調(diào)整細胞與抗體的比例,，以得到最適的細胞/抗體比例。
應(yīng)用和優(yōu)勢
mIHC技術(shù)在腫瘤微環(huán)境,、腫瘤免疫浸潤,、細胞衰老/凋亡/鐵死亡/細胞自噬等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。它能夠通過定量病理分析獲得組織細胞原位各種靶標(biāo)類別,、組分,、表達量等信息，以及各靶標(biāo)及其相互作用的空間定位,、定性和定量等信息,。
1、腫瘤微環(huán)境研究：mIHC技術(shù)可以同時獲取組織的腫瘤標(biāo)記物,、細胞狀態(tài),、免疫細胞分型、免疫調(diào)控,、間質(zhì)細胞等信息,，對腫瘤免疫特征的全貌進行分析。例如,，在腫瘤免疫浸潤和趨化因子受體表達研究中,，mIHC技術(shù)能夠展示不同細胞之間的原位相互作用，這對于理解腫瘤微環(huán)境及藥效評估尤為重要,。
2,、腫瘤免疫治療藥效評估：mIHC在評估抗PD-1/PD-L1治療反應(yīng)中顯示出更高的準(zhǔn)確性。相比于單指標(biāo)IHC,、TMB和GEP等評估方式,，mIHC方法預(yù)測抗PD-1/PD-L1治療的反應(yīng)更準(zhǔn)確，提供了更高的曲線下面積(AUC),。
3,、減少組織樣本損耗：mIHC技術(shù)可以在單個切片中標(biāo)記多個標(biāo)志物，減少樣本損耗,，特別適用于臨床珍貴樣本或穿刺等小組織量樣本,。
FCM技術(shù)在細胞生物學(xué)、分子生物學(xué),、免疫學(xué),、血液學(xué)、腫瘤學(xué),、遺傳學(xué)等多個領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,。它能夠進行細胞大小,、細胞顆粒度、DNA及RNA含量,、蛋白質(zhì)含量,、細胞特異抗原、細胞活性,、胞內(nèi)PH值,、細胞周期、細胞凋亡,、細胞功能分析等的檢測,。
多色流式(FCM)的應(yīng)用：
1、腫瘤細胞參數(shù)檢測：FCM可以檢測腫瘤細胞的增殖活性標(biāo)志分子,、分化/凋亡標(biāo)志分子等,，用于研究腫瘤的發(fā)病機制、制定個性化治療方案以及進行預(yù)后判斷,。例如,，通過FCM檢測細胞DNA含量，可以作為細胞發(fā)生癌變或具有惡性潛能的癌前病變的重要標(biāo)志,。
2,、微小殘留病變(MRD)監(jiān)測：FCM在惡性血液病MRD監(jiān)測中具有高敏感性和特異性，已成為臨床療效觀察和預(yù)后分層的重要依據(jù),。
3,、腫瘤免疫狀態(tài)評估：FCM通過TBNK分析精準(zhǔn)評估腫瘤患者的免疫狀態(tài)，有助于早期診斷惡性腫瘤,，進而為患者后續(xù)的治療提供指導(dǎo)和依據(jù),。
總結(jié)
總的來說，mIHC和FCM在生物醫(yī)學(xué)研究中扮演著不同的角色,。mIHC技術(shù)側(cè)重于組織層面的多靶點分析，強調(diào)原位展示和定量分析,，適用于研究細胞組成,、功能和相互作用。而FCM技術(shù)則側(cè)重于單個細胞的多參數(shù)分析,，適用于細胞生物學(xué)和免疫學(xué)等領(lǐng)域的研究,。了解這兩種技術(shù)的區(qū)別，可以幫助科研人員根據(jù)研究需求選擇合適的技術(shù)平臺,。
多色年末大放送,！
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC,、凋亡,、ELISA,、ChIP、Co-IP,、TR-FRET,、生化檢測、殘留檢測,、多因子檢測),；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子),、分化試劑盒,；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝,；輔助試劑,、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE,、B27,、N2、霍亂毒素B亞單位CTB,、牛腦垂體提取物BPE,、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin,、人源低密度脂蛋白LDL...
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
9
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)