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概述

巨噬細胞是免疫系統(tǒng)中的重要組成部分，在保護機體免受感染和維持組織平衡方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用,。為了研究巨噬細胞的功能和機制,，科學(xué)家們創(chuàng)造了一種不需要從患者或動物采集組織的模型,，即THP-1細胞。THP-1細胞系最初來自一位急性單核細胞白血病患者的血液,，屬于懸浮細胞，有分化為多種巨噬細胞的能力,，成為巨噬細胞分化的好選擇,。THP-1細胞可通過化學(xué)物質(zhì)處理、細胞因子刺激或共培養(yǎng)等方法,，誘導(dǎo)其分化為具有巨噬細胞特性的細胞群,。

機理

細胞因子刺激是一種常見的THP-1細胞誘導(dǎo)分化方法,。IL-4和IL-13等細胞因子能夠促使THP-1細胞分化為巨噬細胞，并啟動特定的信號通路,，進而調(diào)控細胞功能。這種方法可以模擬體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)過程,，并提供一種便捷的方式來研究巨噬細胞在炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等方面的功能,。

巨噬細胞被分為兩種主要類型：M1型巨噬細胞和M2型巨噬細胞,。THP-1細胞通常用佛波酯(PMA)(abs9107)誘導(dǎo)分化為巨噬細胞,，然后在PMA仍然存在的情況下：

加入脂多糖(LPS)(誘導(dǎo)濃度：100ng/mL)(abs47014848)、IFN-γ(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)(abs04123)培養(yǎng)48h,，誘導(dǎo)其向M1極化,；

加入IL-4(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)(abs04698),、IL-13(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)(abs04079)培養(yǎng)48h，誘導(dǎo)其向M2極化,；

最后,，在無刺激物和無PMA的情況下,，用無血清RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸細胞,，可保持72h。

誘導(dǎo)步驟

THP-1誘導(dǎo)分化成巨噬細胞實驗步驟：

（1）THP-1細胞的培養(yǎng)：更多培養(yǎng)技巧可查看THP-1細胞培養(yǎng)攻略

THP-1（人單核細胞白血病細胞）細胞基本信息

THP-1（人單核細胞白血病細胞）

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配置：向1640wan全培養(yǎng)基（含胎牛血清）里加入PMA（誘導(dǎo)濃度：100ng/mL）制成誘導(dǎo)培養(yǎng)基；

（3）接種細胞：收集THP-1細胞并進行計數(shù),，用誘導(dǎo)培養(yǎng)基重懸細胞沉淀調(diào)整細胞密度為5*10^5/mL,，將細胞種入六孔板，每孔加入細胞懸液2mL,；

（4）誘導(dǎo)培養(yǎng)：48h后,，顯微鏡下觀察巨噬細胞構(gòu)建成功；

（5）誘導(dǎo)成功的標(biāo)志：單核細胞THP-1用PMA誘導(dǎo)后,，由懸浮式生長變成貼壁生長,，由圓形變成不規(guī)則形態(tài)，體積進一步增大,，細胞漿疏松,，細胞核增大明顯,，可見大量明顯細胞器,，胞膜周圍可見少量突起。

PMA誘導(dǎo)THP-1細胞培養(yǎng)的相差顯微照片

用PMA孵育THP-1細胞48h，顯示THP-1(40X)在(A)誘導(dǎo)前(B)誘導(dǎo)后的形態(tài)學(xué)變化,。它們的形態(tài)由圓形變?yōu)榧氶L和扁平,。

巨噬細胞進一步誘導(dǎo)成M1型實驗步驟：

（1）誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配置：向1640wan全培養(yǎng)基（含胎牛血清）里加入PMA（誘導(dǎo)濃度：100ng/mL）、脂多糖(LPS)(誘導(dǎo)濃度：100ng/mL)(abs47014848),、IFN-γ(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)（abs04123）,，制成誘導(dǎo)培養(yǎng)基；

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：將已經(jīng)誘導(dǎo)成的巨噬細胞上清棄除,，加入誘導(dǎo)培養(yǎng)基（6孔板,，每孔2mL）培養(yǎng)48h，誘導(dǎo)其向M1極化,。48h后,，顯微鏡下觀察M1細胞是否構(gòu)建成功；

（3）最后,，在無刺激物和無PMA的情況下,，用無血清RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸細胞，可保持72h,。

巨噬細胞進一步誘導(dǎo)成M2型實驗步驟：

（1）誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配置：向1640wan全培養(yǎng)基（含胎牛血清）里加入PMA（誘導(dǎo)濃度：100ng/mL）,、加入IL-4(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)（abs04698）、IL-13(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)（abs04079）制成誘導(dǎo)培養(yǎng)基,；

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：將已經(jīng)誘導(dǎo)成的巨噬細胞上清棄除,，加入誘導(dǎo)培養(yǎng)基（6孔板，每孔2mL）培養(yǎng)48h,，誘導(dǎo)其向M2極化,。48h后，顯微鏡下觀察M2細胞是否構(gòu)建成功,；

（3）最后,，在無刺激物和無PMA的情況下，用無血清RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸細胞,，可保持72h,。

THP-1極化進入M1和M2巨噬細胞圖

M1型形態(tài)多樣，偽足較多,，分叉明顯,，M2型形態(tài)均一，多呈長條型,，分叉不明顯,。

M1和M2型鑒定

上述形態(tài)是初步的鑒別方法，更準(zhǔn)確的可以通過流式細胞術(shù)一般是通過一些巨噬細胞標(biāo)志物進行的,，常見的M1巨噬細胞標(biāo)志物有CD68,、CD80、CD86、CD32等,；常見M2巨噬細胞標(biāo)志物有CD206,、CD204、CD163等,。

M1和M2型常見鑒定marker

今天講解就到這了,，大家如有細胞培養(yǎng)問題，歡迎交流哦,！

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