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文獻(xiàn)信息
題目：Regulation of the migration of colorectal cancer stem cells via the TLR4/MyD88 signaling pathway by the novel surface marker CD14 following LPS stimulation
雜志：Oncology Letters 27.2 (2024): 60.
作者：Li Y, Shi J, Liu Z, et al
圖 文獻(xiàn)引用產(chǎn)品信息
研究背景
結(jié)直腸癌(CRC)是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一,，主要原因與CRC干細(xì)胞(CCSCs)引起的術(shù)后癌癥復(fù)發(fā),、轉(zhuǎn)移或癌細(xì)胞耐藥有關(guān)，CCSCs缺乏一致和可靠的標(biāo)記物限制了它們?cè)谂R床實(shí)踐中的使用,。為了啟動(dòng)促炎反應(yīng),，脂多糖(LPS)和CD14（單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的一種特殊表面標(biāo)志物）通過Toll樣受體4(TLR4)信號(hào)通路相互作用,，此外,，脂多糖通過TLR4信號(hào)通路促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移,，CD14與腫瘤的復(fù)發(fā),、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和治療耐藥有關(guān),，這與CSC的特征（如復(fù)發(fā),、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和耐藥）是一致的,，這表明CD14可能與CCSCs相關(guān),。
研究方法
本研究采用免疫熒光雙標(biāo)記法檢測(cè)CD133和CD14，定量評(píng)估結(jié)直腸癌組織和癌旁組織石蠟包埋切片CCSCs中CD14的表達(dá),。隨后,，從結(jié)直腸癌組織中提取CD14+細(xì)胞，通過分析增殖,、腫瘤親和性和治療耐藥性來檢測(cè)其干性特征,，以證實(shí)表型鑒定。此外,，遷移的體外檢測(cè)能夠檢測(cè)CD14的功能,。
研究結(jié)果
1,、癌旁組織相比，所有結(jié)直腸癌組織中CD14和CD133共表達(dá)的陽性率均顯著升高,。
圖 CD14在CD133標(biāo)記的結(jié)直腸csc中表達(dá)
2,、EdU和CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示結(jié)腸癌CD14+細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的增殖能力,。
圖 結(jié)腸癌CD14+細(xì)胞表現(xiàn)出增強(qiáng)的增殖能力
（CCK-8購自愛必信abs50003 CCK-8試劑盒）
3,、細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)表明，與CD14-細(xì)胞相比,，CD14+細(xì)胞更大,，核分裂增加，聚集成簇,。用裸鼠異種移植實(shí)驗(yàn)表明植入45天后,，CD14+細(xì)胞組的腫瘤明顯大于CD14-細(xì)胞組。
圖 CD14+細(xì)胞在結(jié)腸癌中具有致瘤性
4、耐藥性分析,。CD14+組和CD14-組細(xì)胞的IC50分別為2.554和17.02mg/L,，表明與陰性組相比，陽性組的耐藥性增加,。
圖 CCK-8測(cè)定5-FU對(duì)CD14+和CD14-細(xì)胞48h的IC50效應(yīng)曲線
5,、Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,，與對(duì)照組相比，內(nèi)毒素組表現(xiàn)出更強(qiáng)的遷移能力,，而內(nèi)毒素+中和抗體組的遷移能力比對(duì)照組更強(qiáng)（圖A）,。創(chuàng)面愈合實(shí)驗(yàn)表明，內(nèi)毒素組的細(xì)胞遷移能力明顯高于內(nèi)毒素+中和抗體組（圖B）,。RT-qPCR結(jié)果顯示MyD88基因表達(dá)水平以內(nèi)毒素組最高（圖C）,，Western blotting顯示TLR4和MyD88蛋白的表達(dá)在內(nèi)毒素+中和抗體組和內(nèi)毒素組均顯著高于對(duì)照組，其中內(nèi)毒素組的增加更明顯（圖D）,。
圖 內(nèi)毒素影響細(xì)胞遷移
（RIPA裂解液abs9229,、彩色PAGE快速凝膠試劑盒(10%)abs9367、ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒abs920,、 TLR4抗體abs132000,、MyD88抗體abs135682、LPSabs47014848, 細(xì)胞快速RNA提取試劑盒 abs60027）
常規(guī)裂解液對(duì)比
品名 | RIPA裂解液（弱） | RIPA裂解液（中） | RIPA裂解液（強(qiáng)） |
貨號(hào)-規(guī)格 | abs9230-100mL | abs9228-100mL | abs9229-100mL |
成分表 | 50mM Tris-HC(pH7.4) | 50mM Tris-HC(pH7.4) | 50mM Tris-HC(pH7.4) |
150mM NaCl | 150mM NaCl | 150mM NaCl | |
1%NP-40 | 1%NP-40 | 1%Triton X-100 | |
0.25% 脫氧膽酸鈉 | 0.5% 脫氧膽酸鈉 | 1% 脫氧膽酸鈉 | |
0.1% SDS | 0.1% SDS | ||
以及正釩酸鈉,，氟化鈉,，EDTA和抑肽酶等多種抑制劑 | 以及正釩酸鈉，氟化鈉,，EDTA和抑肽酶等多種抑制劑 | 以及正釩酸鈉,，氟化鈉，EDTA和抑肽酶等多種抑制劑 | |
特點(diǎn) | 不含高濃度去垢劑 | 有較高濃度的去垢劑,，不適合用Bradford法來測(cè)定總蛋白濃度 | 有較高濃度的去垢劑,，不適合用Bradford法來測(cè)定總蛋白濃度 |
裂解強(qiáng)度 | 溫和 | 中 | 強(qiáng) |
膜蛋白 | 一般 | 較好 | 很好 |
胞漿蛋白 | 很好 | 很好 | 很好 |
核蛋白 | 較好 | 較好 | 很好 |
應(yīng)用推薦 | WB，IP,，Co-IP | WB,，IP | WB，IP,，Co-IP |
本期好物推薦
類別 | 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
樣本處理 | abs9346 | 細(xì)胞漿,、細(xì)胞核及細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒 | 50T |
abs9116 | 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100mL | |
abs9162 | 廣譜型磷酸酶抑制劑混合物(100×儲(chǔ)液) | 1mL | |
abs9161 | 廣譜型蛋白酶抑制劑混合物(不含EDTA,100×DMSO儲(chǔ)液) | 1mL | |
蛋白定量 | abs9232 | BCA蛋白定量試劑盒 | 500T |
膠 | 配膠試劑盒、Glass gel預(yù)制膠,、Plastic gel預(yù)制膠,、abs93系列預(yù)制膠 | ||
上樣與電泳 | abs953 | 上樣緩沖液(2×) | 10mL |
abs9829 | 上樣緩沖液(5×) | 10mL | |
abs951 | 電泳液(10×) | 100mL | |
abs923 | 預(yù)染蛋白Marker(10-245kDa) | 500uL | |
轉(zhuǎn)膜 | abs932 | PVDF膜(0.45μm) | 20張 |
abs960 | NC膜(0.45μm) | 20張 | |
abs950 | 電轉(zhuǎn)液(10×) | 100mL | |
封閉 | abs9175 | 脫脂奶粉 | 500g |
abs9157 | 牛血清白蛋白 | 100g | |
抗體稀釋與去除 | abs954 | WB專用一抗二抗稀釋液 | 100mL |
abs967 | Western一抗二抗去除液(強(qiáng)堿性) | 500mL | |
顯色與檢測(cè) | abs920 | ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒 | 25mL×2 |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC,、凋亡,、ELISA、ChIP,、Co-IP,、TR-FRET,、生化檢測(cè),、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè)),；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒,；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒),；化合物大包裝；輔助試劑,、耗材/儀器,、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE,、B27、N2,、霍亂毒素B亞單位CTB,、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX,、重組人胰島素Insulin,、人源低密度脂蛋白LDL...
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