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概念

免疫組化，免疫組織化學(xué)技術(shù) (immunohistochemistry) ,，是利用抗原抗體反應(yīng),，通過(guò)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原，對(duì)蛋白定位,，定性的實(shí)驗(yàn)技術(shù),。

愛(ài)必信組化二抗試劑盒優(yōu)點(diǎn)

圖 abs957即用型高效免疫組化二抗試劑盒

1,、基于聚合物技術(shù)+一抗放大劑,，高敏感性，一抗可再稀釋2-4倍,！
2,、非生物素檢測(cè)系統(tǒng)，更低背景！
3,、快速便捷,，更短孵育時(shí)間！
4,、abs957單品文獻(xiàn)90+,，認(rèn)可度高！用的放心,！

組分

額外準(zhǔn)備一抗（來(lái)源于小鼠或兔子）,、PBS 。

該試劑盒組分可用于50張片子,，適用于一抗來(lái)源為小鼠和兔子的樣本（注意,，不是樣本來(lái)源），DAB顯色,。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

圖 樣本處理

1,、取出固定好的樣本，流水沖洗3次,，每次5min,；

2、脫水,、透明,、浸蠟處理

75%乙醇(1h)——85%乙醇(1h)——95%乙醇(1h)——100%乙醇(50min)——100%乙醇(50min)——100%乙醇(50min)——二甲苯(40min)——二甲苯(40min)——二甲苯(40min)——63℃石蠟(50min)——63℃石蠟(50min)——63℃石蠟(50min)。

3,、包埋處理

脫水結(jié)束后放入預(yù)熱的包埋機(jī),，按要求確定包埋方向進(jìn)行包埋；

4,、玻片做好編號(hào)標(biāo)記,；

5、切片：按照切片要求制備切片,切片厚度一般為3-5um,；

6,、攤片：用毛筆輕托放在46度水浴中攤片；

7,、撈片,、烤片：切片上組織充分展開(kāi)后撈片，后置入60℃烘箱內(nèi)進(jìn)行烤片（（烤片時(shí)間視組織類型而定,，一般組織30min即可,，骨組織等要延長(zhǎng)時(shí)間至1h）），之后便可以進(jìn)行脫蠟,。

操作步驟

圖 免疫組化實(shí)驗(yàn)流程

說(shuō)明：所有的步驟在室溫下操作,，加試劑可以直接滴瓶滴定,，也可以用移液器，一滴=30-40uL,。

1,、脫蠟、水化組織切片二甲苯(5min)——二甲苯(5min)——二甲苯(5min)——100%乙醇(5min)——100%乙醇(5min)——95%乙醇(3min)——85%乙醇(3min)——75%乙醇(3min)——去離子水(5min)

2,、PBS洗2-3次各5min,；

3、抗原修復(fù)：根據(jù)所應(yīng)用的一抗的特殊要求,，對(duì)組織切片進(jìn)行預(yù)處理,；（抗原修復(fù)：將脫蠟好的切片置入抗原修復(fù)液（根據(jù)一抗說(shuō)明書要求選擇用檸檬酸鈉或者EDTA），在高壓鍋內(nèi)進(jìn)行高溫抗原修復(fù),，高壓鍋加熱至飽壓,，然后繼續(xù)加熱5min，關(guān)閉電源,，10min后取出染色盒,，室溫冷卻30min或者使用微波修復(fù)，將抗原修復(fù)完的切片組織周圍擦干,，用組化筆畫上阻水圈）

4,、PBS洗2-3次各5min；

5,、內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶封閉：加入100uL A 液孵育10min,，阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，以減少非特異性背景染色,；

6,、PBS洗2-3次各5min；

7,、血清封閉：加入100uL B 液孵育5min來(lái)減少非特異性染色,。注意：此步驟不要超過(guò)10min；如果一抗在含有5％至10％正常山羊血清的緩沖液中稀釋,，則此步驟可以省略,。

8、PBS洗2-3次各5min,；

9,、一抗孵育：加一抗，室溫或37℃孵育20min,，用量以浸沒(méi)樣本區(qū)域?yàn)闇?zhǔn),，可靈活調(diào)節(jié)；

10,、PBS洗2-3次各5min,；

11、一抗放大劑孵育：加入100uL C 液孵育10min,；

12,、PBS洗2-3次各5min；

13,、二抗孵育：加入100uL D 液室溫或37℃孵育10min,。注意：此液對(duì)光敏感，注意避光,。

14,、PBS洗2-3次各5min；

15,、DAB試劑配制：配制新鮮底物液：將30uL的F液和1mL的E液充分混合,，即配制成新鮮底物液（該底物液可存放2周）。

16,、DAB顯色：加入100uL新鮮底物液, 孵育5min,。注意：DAB顯色時(shí)間需要鏡下控制，選擇最佳顯色時(shí)間,，做好防護(hù),。

17、終止顯色：去離子水沖洗,；

18,、復(fù)染：蘇木素復(fù)染3min左右、自來(lái)水沖洗,，1%鹽酸酒精中分化1s,，自來(lái)水沖洗；

19,、脫水透明：80%,、95%、100%,、100%酒精,，每步5min、二甲苯5min,、兩次,；

20、中性樹(shù)膠封片 蓋住玻片時(shí)從一端傾斜45°,，小心不要產(chǎn)生氣泡,。

免疫組化產(chǎn)品推薦

好消息！Absin文獻(xiàn)獎(jiǎng)勵(lì)重磅升級(jí),！

Absin特色產(chǎn)品線：

WB相關(guān)：ECL發(fā)光液,、預(yù)染marker,、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒,、組化筆,；IP/CoIP試劑盒；激動(dòng)劑/抑制劑,；血清,、BSA、蛋白酶K,、CTB,、TTX、CEE,；凋亡試劑盒,；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒,；重組蛋白,；抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體,、對(duì)照抗體,；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...