免疫 (共) 沉淀 (IP/CoIP)
是基于抗體和蛋白的特異性親和作用,，通過(guò)捕獲與蛋白或抗原特異性結(jié)合的抗體，進(jìn)而從復(fù)雜的樣品中捕獲及富集目標(biāo)蛋白,，同時(shí)可以測(cè)定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子的一種技術(shù)。
瓊脂糖珠VS磁珠
瓊脂糖珠作為免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中的固相支持物已經(jīng)歷經(jīng)多年,，隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展,，磁珠開始大幅取代瓊脂糖珠，成為免疫沉淀純化方法的首先選擇,，許多剛接觸的研究者都要面臨方法選擇的問(wèn)題,，磁珠法VS瓊脂糖珠法，區(qū)別在哪里,？分別有什么優(yōu)缺點(diǎn),？
圖1 瓊脂糖珠結(jié)構(gòu)
圖2 磁珠
區(qū)別：
1、抗體結(jié)合量：瓊脂糖珠（直徑50-150μm）明顯大于磁珠（直徑1-4μm）,，所以單個(gè)瓊脂糖珠結(jié)合抗體的量大于磁珠,，但是磁珠每體積的磁珠比瓊脂糖珠的量多；
2,、結(jié)合能力：瓊脂糖珠是多孔的海綿狀結(jié)果,，與抗體的結(jié)合能力優(yōu)于磁珠；
3,、非特異性結(jié)合：瓊脂糖珠的非特異性結(jié)合比磁珠多,，樣品中的非目的蛋白或者抗體的任何部位都可能與之結(jié)合，所以在瓊脂糖珠法中,，樣品的預(yù)處理非常重要,；
4、抗體的損耗：瓊脂糖珠大于磁珠,，由于瓊脂糖珠的多孔結(jié)構(gòu),，抗體很容易被困其中，并且,，離心洗滌的過(guò)程中很容易流失,；
5、實(shí)驗(yàn)時(shí)間：磁珠法可室溫短時(shí)間孵育（僅限Absin abs9649和abs955的比較）,；
6,、特殊設(shè)備：磁珠法需要自備磁力架,。
abs9649（磁珠法）和abs955（瓊脂糖珠法）常見問(wèn)題：
圖 abs9649免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒(磁珠法)
圖 abs955免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒
以下問(wèn)題僅針對(duì)愛(ài)必信現(xiàn)有兩款試劑盒abs9649和abs955
一、樣品處理
1,、兩個(gè)試劑盒中l(wèi)ysis buffer都要添加PMSF嗎,，怎么使用？
兩個(gè)試劑盒中的PMSF都要額外準(zhǔn)備,，推薦abs9146,，根據(jù)使用量，取每1mL lysis buffer加入10ul PMSF（100mM,，溶解174mg的abs9146于足量的異丙醇中,，定容到10mL，分裝成小份貯存于-20℃,。）使PMSF的最終濃度為1mM,，混勻備用 （PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。磁珠法緩沖液請(qǐng)按說(shuō)明書配置后使用,，buffer稀釋均可用超純水,。
2、abs9649如果沒(méi)有超聲破碎儀的話,，能不能用酶解的辦法破碎細(xì)胞,？
酶解和超聲都可以，酶按照實(shí)驗(yàn)室正常使用濃度配制即可,。
3,、蛋白的量如何估算？
可以使用BCA蛋白定量試劑盒(abs9232),。
4,、如果我的細(xì)胞裂解物里面蛋白含量高于試劑盒要求的總蛋白含量，我應(yīng)該用什么試劑進(jìn)行稀釋呢,？
常規(guī)用PBS稀釋即可,。
二、如何減輕瓊脂糖珠非特異性吸附,？
可以通過(guò)多次洗滌,，和樣品預(yù)處理（適當(dāng)延長(zhǎng)Protein A和Protein G的孵育時(shí)間）來(lái)降低背景，但應(yīng)注意,，選擇此步驟后,，試劑盒中protein A和protein G對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)減半。
三,、結(jié)合過(guò)程中,，4℃混合過(guò)夜孵育可用什么儀器？
可以用混合儀abs72030或abs72019。
圖 abs72019旋轉(zhuǎn)混合儀(XHE-100)
四,、abs955中beads出現(xiàn)吸不出來(lái)的情況,，怎么處理？
吸之前需注意槍頭要剪一下再吸,，如若beads吸不上來(lái),，可加入等體積的20%乙醇混勻后再吸。
五,、如果我后續(xù)是想要跑native膠,，不做變性電泳，如何選擇樣品緩沖液,？
用不含有SDS的WB上樣緩沖液,，但不經(jīng)過(guò)變性，蛋白能否解離下來(lái),，我們無(wú)法確定,，不能保證您后續(xù)的實(shí)驗(yàn)效果。
六,、磁珠法兩種洗脫方案的區(qū)別？
兩種洗脫方案均包含捕獲抗體及目的抗原,，低pH 洗脫樣本中抗體為完整結(jié)構(gòu),，變性洗脫樣本中抗體解離為重鏈、輕鏈,，請(qǐng)根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)需求選擇洗脫方案,。
*文中圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)，僅供學(xué)習(xí)參考用
IP&WB全套試劑清單推薦：
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 貨期 |
abs955 | 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒 | 50T | 現(xiàn)貨 |
abs9649 | 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒(磁珠法) | 50T | 現(xiàn)貨 |
abs9146 | PMSF | 100g | 現(xiàn)貨 |
abs9116 | 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100mL | 現(xiàn)貨 |
abs9239 | 免疫印跡及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑) | 100mL | 現(xiàn)貨 |
abs20035 | Rabbit IgG Antibody | 10mg | 現(xiàn)貨 |
abs20038 | Mouse IgG Antibody | 1mg | 現(xiàn)貨 |
abs9232 | BCA蛋白定量試劑盒 | 500T | 現(xiàn)貨 |
abs924 | 預(yù)染蛋白marker, 10-180kDa | 250uL | 現(xiàn)貨 |
abs950 | 電轉(zhuǎn)液(10×) | 1L | 現(xiàn)貨 |
abs954 | WB專用一抗二抗稀釋液 | 100mL | 現(xiàn)貨 |
abs961 | PBS緩沖液(10×) | 500mL | 現(xiàn)貨 |
abs952 | TBST(10×) | 1L | 現(xiàn)貨 |
abs9157 | 牛血清白蛋白 | 100g | 現(xiàn)貨 |
abs920 | ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒 | 250mL×2 | 現(xiàn)貨 |
好消息,！Absin文獻(xiàn)獎(jiǎng)勵(lì)重磅升級(jí),！
Absin特色產(chǎn)品線：
WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker,、預(yù)制膠,；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆,；IP/CoIP試劑盒,；激動(dòng)劑/抑制劑；血清,、BSA,、蛋白酶K、CTB,、TTX,、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒,；ELISA試劑盒,；重組蛋白；抗體: 二抗,、標(biāo)簽抗體,、對(duì)照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...
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