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細胞養(yǎng)得好,,血清有門道

閱讀:953      發(fā)布時間:2023-8-24
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血清是細胞培養(yǎng)的必要成分之一,,胎牛/新生牛/小牛/成牛種類繁多,加上市場上各種品牌,,讓細胞小白挑花了眼,,小愛圍繞以下問題帶您一站式了解。

 

? 血清為何對細胞狀態(tài)影響如此之大,?
? 血清到底如何挑選,?
? 絮狀物、沉淀,、過濾,、滅活等使用常見問題?
? 細胞出現(xiàn)問題如何判斷是否與血清有關(guān),?

 

一,、血清為何對細胞狀態(tài)影響如此之大?

 

血清中含有多種已知和未知的成分,,主要包括:蛋白質(zhì)和多態(tài),、多種因子、氨基酸,、激素,、其他微量元素及不確定成分。其中生長因子促進細胞增值,,附著因子促進細胞貼壁并具有抗胰酶活性,,各種蛋白質(zhì)可提供細胞生長所必需的營養(yǎng)物質(zhì),礦物質(zhì),、脂類及激素也可以結(jié)合于血清的蛋白質(zhì)中,,由此可見血清在細胞培養(yǎng)過程中十分關(guān)鍵,其本身存在多種未知成分,,采血時間差異,,批次之間差異等,綜合決定了血清對細胞狀態(tài)的影響程度,。

 

根據(jù)動物來源不同,,血清可分為馬血清、牛血清,、豬血清,,還有羊,、雞、兔等動物來源的血清,,根據(jù)采血時間,、血緣品質(zhì)又分為不同類別,加之不同工藝的加工,,市面上可見的血清種類繁多,。


愛必信血清

 

通常馬血清用于神經(jīng)細胞的培養(yǎng),,豬血清用于疫苗生產(chǎn),,新生牛作為乳制品產(chǎn)業(yè)中的副產(chǎn)品,其血清產(chǎn)量更高,、效益更好,,適用細胞范圍也更廣。

 

為什么胎牛血清比新生牛血清貴,?隨著胎齡的增長,,補體系統(tǒng)逐漸發(fā)育,各種生長因子逐漸減少,,進食后的小牛血清中IgG含量增多,,使血清隨著采血時間后移質(zhì)量相對下降,而且每頭胎牛僅能獲得約500ml血清,,種種因素使得胎牛血清成為細胞培養(yǎng)的血清,,價格也相對更加昂貴。為了滿足不同實驗需求,,產(chǎn)生了適合外泌體研究的去外泌體血清,,適合脈沖示蹤實驗的透析胎牛血清等等,而不同的生產(chǎn)工藝產(chǎn)生了特級,、優(yōu)級,、標準級血清。

 

牛血清根據(jù)采血時間不同分類表


類別

來源

胎牛血清

對孕期母牛腹腔穿刺獲取

新生牛血清

出生 4-6h 內(nèi)未進食進水的新生牛靜脈采血

小牛血清

出生后 10-90d 的小牛靜脈采血

成年牛血清

出生超過 6個月 的牛靜脈采血




 

判斷血清質(zhì)量的四個指標:依據(jù)《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標準2000年版》

 

? 有害微生物,,不能含有牛腹瀉病毒,,不能被噬菌體、支原體,、真菌污染,;
? 內(nèi)毒素,不應(yīng)高于10 EU/ml,;
? 總蛋白含量,,3.5%~5%(w/V),過高可能是由于采血時間較晚,,過低血清可能被人為稀釋,;
? 血紅蛋白,從一定程度上反映了采集流程的規(guī)范程度。不應(yīng)高于0.02% (w/V),。

 

此外還流傳著通過顏色判斷血清質(zhì)量的方法,,小愛認為不夠科學,血清顏色由是血紅蛋白(紅)和膽紅素(黃)決定,,胎牛尚未發(fā)育好,,因此其凝血功能不完善,所以采集血清時溶血不可避免,,根據(jù)血紅蛋白是否超標來判斷采血過程的規(guī)范性更為精準,。

 

二、絮狀物,、沉淀,、過濾、滅活等使用常見問題,?

 

我們推薦大家養(yǎng)成先4℃解凍,,室溫或37℃融解的方法,由于蛋白質(zhì)等干物質(zhì)的融解速度大于水這類溶劑,,所以我們在血清融解過程中最好多次混勻,,避免大量蛋白融于極少部分水,而產(chǎn)生蛋白沉淀,。

 

如果融解血清時出現(xiàn)沉淀也不要著急,,產(chǎn)生的沉淀多為脂蛋白和纖維蛋白,血清中這些物質(zhì)的含量遠遠高于細胞生長需求,,所以并不影響后續(xù)細胞培養(yǎng)效果,,血清打開后分裝使用,避免反復(fù)凍融可以降低出現(xiàn)沉淀的概率,,遇到血清沉淀的情況我們可以嘗試延長融解時間或者離心去除沉淀,。


血清融解產(chǎn)生的沉淀(圖片來源于網(wǎng)絡(luò),僅供學習使用)

 

此外血清在生產(chǎn)時經(jīng)過多次過濾除菌,,有些血清還經(jīng)過輻照滅菌,,所以在一般無需過濾。熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì),,但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要,,補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出,其他的補體成分也很少,。

 

三,、細胞出現(xiàn)問題如何判斷是否與血清有關(guān)?

 

主要看是否更換了新批次的血清,,不同批次的血清成分可能有一定程度的改變,,所以推薦購買血清時多囤幾瓶同批次的,,更換批次后,一定要注意觀察細胞狀態(tài),。

 

四,、血清批間差會造成細胞哪些改變呢?

 

主要表現(xiàn)為增長變慢,,細胞邊界不清,,形態(tài)改變,空泡化,,貼壁能力減弱,,漂浮,凋亡增多等,。


 

血清批間差造成的細胞聚團,、形態(tài)改變,、空泡化

 

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貨號

品名

應(yīng)用

abs981

胎牛血清(特級)

適合各類細胞,,特別是干細胞,、原代細胞等血清依賴度高的細胞

abs972

胎牛血清(優(yōu)級)

適用于特異抗體要求較高產(chǎn)品、較貴細胞,、種細胞培養(yǎng)與封閉

abs973

胎牛血清(優(yōu)級),,輻照

適用于特異抗體要求較高產(chǎn)品、較貴細胞,、種細胞培養(yǎng)與封閉

abs974

胎牛血清(標準級)

適用于正常封閉與增殖旺盛的常規(guī)細胞系的培養(yǎng)

abs975

胎牛血清(標準級),,輻照

適用于正常封閉與增殖旺盛的常規(guī)細胞系的培養(yǎng)等。

abs977

新生牛血清(特級)

適用于特異抗體要求較高產(chǎn)品,、較貴細胞及活疫苗產(chǎn)品生產(chǎn)

abs978

新生牛血清(優(yōu)級)

適用于細胞培養(yǎng),、疫苗產(chǎn)品生產(chǎn)、正常封閉等,。

abs991

成牛血清(標準級)

適用于正常封閉和體外診斷試劑等,。






好消息!Absin文獻獎勵重磅升級,!


 


Absin特色產(chǎn)品線:

WB相關(guān):ECL發(fā)光液,、預(yù)染marker,、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒,、組化筆,;IP/CoIP試劑盒;激動劑/抑制劑,;血清,、BSA、蛋白酶K,、CTB,、TTX、CEE,;凋亡試劑盒,;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒,;重組蛋白,;抗體: 二抗、標簽抗體,、對照抗體,;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

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