一般細(xì)胞長(zhǎng)至80%-90%密度則需要傳代消化,,貼壁細(xì)胞傳代前,需要把細(xì)胞用消化試劑從培養(yǎng)容器表面解離出來(lái),,細(xì)胞得以分離成單個(gè)懸液傳代至含新鮮培養(yǎng)基的新容器內(nèi),。
細(xì)胞消化液使用原料為基因工程方法生產(chǎn)的胰蛋白酶,無(wú)動(dòng)物源性,,無(wú)病毒污染可能性,,且內(nèi)毒素水平低于藥典標(biāo)準(zhǔn)(<0.06EU/mL)??梢蕴娲鷦?dòng)物源性胰蛋白酶,。可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞等原代細(xì)胞,。
使用方法:
1、在顯微鏡下觀察細(xì)胞,,當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%,,即可傳代。
2,、在超凈臺(tái)/安全柜中,,吸走培養(yǎng)瓶中舊的培養(yǎng)液,加入PBS溶液洗一次,,加入細(xì)胞消化液使之*覆蓋皿/瓶底,。
3、室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-3分鐘(不同細(xì)胞類型消化時(shí)間略有差異),,顯微鏡下觀察到大部分細(xì)胞邊緣開始脫離皿/瓶底,。
4、加入與消化液等倍體積細(xì)胞培養(yǎng)基,,用移液器輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細(xì)胞,,并輕輕吹打混勻,使細(xì)胞*分散,。
5,、將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,1200rpm離心3min,。
6,、棄上清,,加入對(duì)應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)液,重懸細(xì)胞,,按比例進(jìn)行傳代,,均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中,置于37℃,,5%CO2條件下培養(yǎng),。
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