在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，也經(jīng)常會(huì)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行凍存操作,。細(xì)胞凍存通常是指將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,，減少細(xì)胞代謝，以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù),。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。
細(xì)胞凍存液，作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液,，不僅僅是說(shuō)只是用來(lái)進(jìn)行細(xì)胞的保存,，在細(xì)胞的購(gòu)買、寄贈(zèng),、交換和運(yùn)送過(guò)程中也起著關(guān)鍵作用,，因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要。
如果不加任何條件直接凍存細(xì)胞,，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶,，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷,、電解質(zhì)升高、滲透壓改變,、脫水、pH值改變,、蛋白變性等,，從而引起細(xì)胞死亡。而細(xì)胞凍存液就相當(dāng)于細(xì)胞的保護(hù)劑,，在凍存細(xì)胞時(shí)將細(xì)胞懸浮于凍存液中,，可使冰點(diǎn)降低，提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,，在緩慢的凍結(jié)條件下,，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞，可以防止或減少冷凍冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷作用,。這樣就使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),，在需要時(shí)直接復(fù)蘇就可恢復(fù)細(xì)胞活性。
傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液
傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液是使用培養(yǎng)基,、血清和DMSO按照一定的比例混合,，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%,，統(tǒng)稱為含血清細(xì)胞凍存液,。
含血清細(xì)胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，
如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,，然后移至-20℃冰箱30分鐘,，再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)(或隔夜)，最后才移至液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期的儲(chǔ)存,。
(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過(guò)1個(gè)小時(shí),，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量的死亡,。)
無(wú)血清細(xì)胞凍存液
無(wú)血清細(xì)胞凍存液,，不含血清，含DMSO,、葡萄糖等各種細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)成分,、pH調(diào)節(jié)劑等成分。不含動(dòng)物來(lái)源性蛋白,，能減少各類病毒,、霉菌和支原體等污染，確保凍存細(xì)胞安全,。通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株,。2-8℃即可穩(wěn)定保存,，無(wú)需冷凍，即取即用,。凍存細(xì)胞,，無(wú)需程序降溫。凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上,。
用途
1.無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于造血干細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞等干細(xì)胞的儲(chǔ)存。
2.無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于T淋巴細(xì)胞,、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲(chǔ),。
3.無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于其他類型哺乳動(dòng)物細(xì)胞的儲(chǔ)存。
產(chǎn)品性能
1.不含牛血清,，無(wú)動(dòng)物源組分,。
傳統(tǒng)的凍存液，一般由胎牛血清,、DMSO等組分組成,。胎牛血清取自牛，因此,，難以應(yīng)用到需要避免接觸動(dòng)物源的應(yīng)用領(lǐng)域,。用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途，無(wú)動(dòng)物源組分,。
2.2-8℃即可穩(wěn)定保存,，無(wú)需冷凍，即取即用,。
為了避免反復(fù)凍融,，傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液，需要分裝成小管后置于-20℃環(huán)境下保存,。細(xì)胞沉淀加無(wú)血清細(xì)胞凍存液,，直接放入-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存即可，無(wú)需再進(jìn)行分裝,。
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