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　　蛋白酶K,，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵,。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性,。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定，還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力,，因而它應(yīng)用很廣泛,，包括制備脈沖電泳的染色體DNA，蛋白質(zhì)印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶,。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml,。在較廣的pH范圍內(nèi)(pH4-12.5)均有活性。

　　蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)：20mg/ml蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)(proteinaseK)：將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,，輕輕搖動(dòng),，直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合,。加水定容到10ml,，然后分裝成小份貯存于-20℃。

　　蛋白酶K的保存：保存在-20℃冰箱里,，避免反復(fù)凍融,，有效保證12月。

　　孵育溫度為55至65℃,，理想孵育溫度為58℃,，孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí);理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。

　　作用：蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,，以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì),，提高雜交信號(hào).但蛋白酶K的濃度過高、消化時(shí)間過長(zhǎng)或孵育溫度過高時(shí),，都會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,，導(dǎo)致組織切片的脫落，細(xì)胞核的消失,，從而影響雜交結(jié)果,。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用，解決上述出現(xiàn)的問題,，并能達(dá)到理想的染色效果,。