ELISA（免疫酶聯(lián)吸附實(shí)驗(yàn)）是免疫學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)之一，大部分生命科學(xué)領(lǐng)域的科研工作者對其都不陌生,。因?yàn)槠?strong>特異性強(qiáng),，靈敏度高，可精確定量的特性,，在基礎(chǔ)科研和臨床診斷中,，ELISA技術(shù)都應(yīng)用廣泛，相信很多關(guān)注我們的小伙伴也都做過ELISA,。
ELISA實(shí)驗(yàn)步驟少,，流程短，購買的即用型試劑盒也都有指導(dǎo)性很強(qiáng)的操作說明書,，單次實(shí)驗(yàn)3-6小時(shí)即可得到結(jié)果,，實(shí)驗(yàn)小白也可以很快的上手。但是,，各位同學(xué)可不要輕視哦,，ELISA和WB、IHC等基礎(chǔ)免疫實(shí)驗(yàn)一樣，都是易學(xué)難精,，上手容易,，但想要得到穩(wěn)定的結(jié)果，還是要花一點(diǎn)心思的,。小編在這里匯總了一些做ELISA的客戶咨詢我們的問題,，把其中有代表性的集中做成了FAQ，大家快看看這其中有沒有困擾你ELISA實(shí)驗(yàn)的問題吧~
Q: ELISA可以檢測胞內(nèi)蛋白么,？
A: 可以的,，大部分ELISA指標(biāo)均為炎癥因子、趨化因子等分泌類型蛋白,，支持的樣本類型也多為血清,、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等液體樣本,。如需檢測胞內(nèi)蛋白,，首先需要確認(rèn)待測指標(biāo)是否在胞內(nèi)表達(dá)，然后選用支持組織勻漿樣本的ELISA試劑盒即可,，將組織樣品或細(xì)胞樣品進(jìn)行裂解,，提取胞內(nèi)蛋白后進(jìn)行蛋白定量，保證每孔上樣總蛋白量一致即可,。
Q: ELISA可以測DNA的表觀么,？
A: 不可以，ELISA是利用免疫學(xué)原理,，定量檢測蛋白質(zhì)表達(dá)的技術(shù),。測DNA表觀遺傳學(xué)，主要是檢測DNA甲基化,，可以選用ChIP技術(shù),。
Q: 夾心法ELISA實(shí)驗(yàn)中的捕獲抗體和檢測抗體是同一個(gè)抗體么？
A: 不是的,，在雙抗夾心法ELISA實(shí)驗(yàn)中,，會同時(shí)用到捕獲抗體和檢測抗體，這兩個(gè)抗體是針對同一抗原蛋白的不同抗原位點(diǎn)的兩種抗體,，這樣才可以同時(shí)結(jié)合抗原分子,。這也是雙抗夾心法ELISA不適用與小分子抗原和半抗原等待測指標(biāo)的原因。
Q: 試劑盒里面有捕獲抗體么,？
A: 即用型ELISA試劑盒中,，捕獲抗體已經(jīng)預(yù)包被至試劑盒中的ELISA板上，沒有單獨(dú)的捕獲抗體提供,，直接使用ELISA板孵育稀釋后的樣本及標(biāo)準(zhǔn)品即可,。非即用型的ELISA試劑盒會有捕獲抗體提供，需按照說明書推薦的工作濃度，用稀釋液稀釋后自行包被,。
Q: 捕獲抗體如何包被在96孔板上,？
A: 如果選用的是即用型ELISA試劑盒，無需進(jìn)行抗體包被,，因?yàn)樵噭┖兄械臋z測抗體已經(jīng)事先包被在檢測板中,；如果是非即用型的ELISA試劑盒，需要自己在實(shí)驗(yàn)前提前進(jìn)行抗體包被,，簡要步驟入下：首先,，要選擇ELIS*別的板子，材質(zhì)應(yīng)為聚苯乙烯,；然后用抗體包被液將捕獲抗體稀釋（pH9.6的碳酸鹽緩沖液或pH7.2的PBS或pH7-8的Tris-HCl）成工作濃度,，再每孔加100 μl（96孔板加樣量）稀釋后的捕獲抗體，室溫或4℃過夜包被,，然后進(jìn)行洗板和封閉之后再次洗板即可使用,，如需長期保存,，則需要真空凍干后保存,。
Q: ELISA實(shí)驗(yàn)中，酶標(biāo)抗體是什么抗體,？識別的目標(biāo)又是什么,？
A: 這個(gè)問題需要具體分析，在直接法ELISA中,，酶標(biāo)抗體直接識別抗原,，即可檢測，但缺少二抗放大,，且靈敏性不高,。在間接法ELISA中，酶標(biāo)抗體作為二抗,，識別檢測抗體,。而在目前應(yīng)用廣泛的雙抗夾心法ELISA中，酶標(biāo)抗體識別的也是檢測抗體,，對檢測抗體進(jìn)行識別和酶標(biāo)記,。
Q: 試劑盒有推薦樣本稀釋濃度還需要自己測嗎？
A: 試劑盒一般會給出不同樣品類型的的推薦稀釋比例,，但是為大致范圍,，比較好還是根據(jù)自己的樣本情況，設(shè)計(jì)預(yù)實(shí)驗(yàn)測量計(jì)算,。尤其是待測蛋白為炎癥因子時(shí),，因?yàn)樵诓煌M別樣本間差異巨大，更是需要預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測后稀釋。
Q: 做實(shí)驗(yàn)前怎么知道待測血清中炎癥因子的范圍呢,？多大是高多小是低,？
A: 需要根據(jù)文獻(xiàn)推測，一般在健康人樣本中,，炎癥因子表達(dá)很低,，接近ELISA檢測下限，樣品無需稀釋或1:1稀釋即可,，如已知為炎癥疾病或造模樣本,，可參考文獻(xiàn)，在預(yù)實(shí)驗(yàn)中設(shè)置1:10-100（或更高）的稀釋比例,，預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測后確定濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn),。
Q: ELISA實(shí)驗(yàn)中，檢測計(jì)算抗原的濃度,，臨界值怎么確定,？
A: 根據(jù)曲線測定的濃度，建議落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間位置較好,，極限一般不要超過標(biāo)準(zhǔn)曲線的上下限,，如果超出較多，會影響計(jì)算結(jié)果準(zhǔn)確性,，建議調(diào)整稀釋比例,。
Q: 配好的抗體沒用完如何保存，可保存多久,？預(yù)實(shí)驗(yàn)用了一個(gè)試劑盒里面的部分板子和試劑,，剩下的板子和試劑還能繼續(xù)用于正式實(shí)驗(yàn)嗎？
A: 針對愛必信的ELISA試劑盒來講,，在說明書中有各組分拆開后的保質(zhì)期,，配好的母液和拆封的板子，可以在四度保存,，保質(zhì)期為一個(gè)月左右,。剩下的板子和試劑在保質(zhì)期內(nèi)是可以繼續(xù)用于正式實(shí)驗(yàn)的，為保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,，還是建議間隔時(shí)間不要太長,，一周之內(nèi)更好，需注意試劑避免污染,，板子保持干燥,。
篇幅所限，小編在這里先放上關(guān)于ELISA原理,、樣本和預(yù)實(shí)驗(yàn)的10個(gè)問題,，后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作及數(shù)據(jù)分析方面的問題會在接下來的文章中分享,，感興趣的小伙伴們繼續(xù)關(guān)注吧~
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