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Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,，然后利用抗體進(jìn)行檢測,。對已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測，對新基因的表達(dá)產(chǎn)物,，可通過融合部分的抗體檢測,。我們將通過以下幾個(gè)方面來詳細(xì)地介紹一下Western Blot技術(shù)：

【原理】

與 Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,，被檢測物是蛋白質(zhì),，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗,。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如PVDF膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分,。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。

【分類】

western顯色的方法主要有以下幾種：

     i. 放射自顯影                        ii. 底物化學(xué)發(fā)光ECL                        iii. 底物熒光ECF                       iv. 底物DAB呈色

現(xiàn)在常用的有底物化學(xué)發(fā)光ECL和底物DAB呈色,，目前發(fā)表文章通常是用底物化學(xué)發(fā)光ECL,。只要買現(xiàn)成的試劑盒就行，操作也比較簡單,，原理如下（二抗用HRP標(biāo)記）：反應(yīng)底物為過氧化物+魯米諾,，如遇到HRP，即發(fā)光,，可使膠片曝光,，就可洗出條帶。

【主要試劑】

30%丙烯酰胺混合液,，1.5M Tris（pH 8.8）,，1.0M Tris（pH 6.8）,10%SDS，10%過硫酸銨(APS),，N,N,N',N'四甲基二乙胺(TEMED)等,。

【主要步驟】

(：[email protected],；[ 請注明：姓名/ 單位/ / 地址 ])
 

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二抗,、標(biāo)簽抗體、對照抗體,；WB相關(guān)：ECL發(fā)光液,、預(yù)染marker、預(yù)制膠,；IHC相關(guān)：二抗試劑盒,、組化筆；IP/CoIP試劑盒；細(xì)胞因子,、信號通路調(diào)節(jié)劑,；血清、BSA,、蛋白酶K,、CTB、TTX,、CEE,；凋亡試劑盒、呼吸爆發(fā)試劑盒,；動植物提取物...