1.如何保存和分裝抗體,？
對于許多抗體而言,，分裝為小等份在 -20℃ 或 -80℃下凍存是*的保存條件?？贵w保存應避免反復凍融,，分裝可以zui大限度減少凍融對抗體造成的損壞，還可避免多次從同一管中移取抗體而引入污染,。但是每份不應該少于10 uL,。分裝的體積越小，抗體的濃度受蒸發(fā)和管壁吸附的影響就會越大,。大部分情況下,，抗體在 4 ℃條件下能夠保存1-2周。但有部分特例,。為了防止微生物污染,，可在抗體中加入適當濃度的NaN3,。如果要用抗體對活細胞進行染色或處理，或者要用抗體進行體內(nèi)研究,，則不能使用含NaN3的抗體制備物,；這種抗菌劑對大部分生物體都有毒害作用。部分加甘油的抗體,，直接儲存在-20℃即可,。
2.如何正確選擇一抗？
根據(jù)檢測的種屬和實驗方法尋找相關一抗產(chǎn)品,，樣品的性質決定哪個抗體zui合適,。需考慮以下方面：
(1) 檢測的蛋白質區(qū)域。有些抗體僅能識別已還原和變性的蛋白質,，因為這樣露出了蛋白折疊形成的二級和三級結構中隱藏起來的表位,。而有些抗體僅能識別天然、折疊狀態(tài)的蛋白質上的表位,。免疫組化中,，有些抗體僅適用于未固定的冷凍組織，如果沒有抗原修復步驟逆轉福爾馬林固定所引起的交聯(lián),，那么其它抗體不能與福爾馬林固定,、石蠟包埋的組織中的靶標結合。
(2) 樣品處理方式,；有些抗體要求樣品用特定方式處理,。
(3) 產(chǎn)生一抗的生物體應與樣品生物體不同；這是為了避免抗免疫球蛋白的二抗與樣品中的內(nèi)源性免疫球蛋白間發(fā)生交叉反應,。
3.如何正確選擇二抗,？
二抗是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體，在免疫學反應中,，經(jīng)常需要針對試驗選擇不同的二抗,。考慮以下方面：
(1) 針對一抗來源的二抗,；比如一抗是小鼠來源的,，二抗就要是抗小鼠的。
(2) 二抗需與一抗的類別或亞類相匹配,；比如一抗是IgM,，二抗就要是抗IgM的抗體。
(3) 為了增加特異性,、降低背景：可以選擇Fab段的抗體（去除Fc段的）,、經(jīng)過標本來源種屬血清吸附的的二抗。
(4) 查看二抗的說明書,，選擇經(jīng)過驗證可以用于相應實驗方法的二抗,。
(5) 可以通過一抗說明書頁面的“Related Products”來選擇合適的二抗,。
4.二抗耦聯(lián)標記
標記物與抗體偶聯(lián)，以顯示目標蛋白的存在,。標記物的選擇取決于實驗應用,。主要有：
(1) 熒光標記,；熒光標記物在特定波長的光激發(fā)下發(fā)出可見范圍內(nèi)的光,。有多種熒光標記物可供選擇，它們具有*的激發(fā)和發(fā)射特性,。
(2) 酶標記,；酶標記物如辣根過氧化物酶 (HRP) 和堿性磷酸酶 (AP) 在與適當?shù)牡孜锘旌蠒r形成有色沉淀。
(3) 生物素標記,；生物素化的抗體可用于放大信號,，具體通過親和素-生物素-酶或熒光染料復合物或者親和素或鏈霉親和素偶聯(lián)到酶或熒光染料實現(xiàn)。
5. 如何確定抗體的稀釋比例?
如果說明書中有推薦的稀釋比例,，請按照該稀釋比例進行實驗,。但是由于標本類型、實驗條件,、操作環(huán)境等各種因素的影響,，推薦濃度僅作為參考。實驗者需要在推薦濃度周圍進行多個濃度梯度的實驗,，從中發(fā)現(xiàn)*的稀釋比例,。如果說明書沒有推薦稀釋比例，僅注明“Use at an assay dependent dilution”,，就需要做大量的預實驗來摸索*的稀釋比例,。
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