胎牛血清
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡,、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異,。血清中含有各種血漿蛋白、多肽,、脂肪,、碳水化合物、生長因子,、激素,、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的,。
胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛,。胎牛血清是品質(zhì)zui高的,因為胎牛還未接觸外界,,血清中所含的抗體,、補體等對細胞有害的成分zui少。
胎牛血清要求:
1,、性狀,、外觀:淺黃色澄清、無溶血,、無異物稍粘稠液體,。
2、蛋白質(zhì)含量:3.5%~5.0%( w/v)
3、血紅蛋白含量:≤ 0.02%( w/v)
4,、無菌檢驗:陰性
5,、支原體檢驗:陰性
6、細菌內(nèi)毒素:≤5(EU/ml)
7,、牛腹瀉病毒:陰性
8,、大腸桿菌噬菌體:陰性
9、支持細胞增殖:(Sp2/0-Ag14) 生長曲線 (接種濃度)zui大增殖濃度 ≥2.5×106個/ml,,細胞倍增時間:≤15h,,克隆率:≥85%
胎牛血清功能
牛血清是細胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必需的營養(yǎng)成份,,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),,具有極為重要的功能。
1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素,,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2. 提供結(jié)合蛋白,,能識別維生素,、脂類、金屬和其他激素等,,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力,。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用,。
4.是細胞貼壁,、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用,。
6.提供蛋白酶抑制劑,,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害,。
胎牛血清的評估標準
胎牛血清(FBS)是zui常用的血清添加劑,,因為它富含生長因子、蛋白和大分子,。盡管無血清和非動物來源的培養(yǎng)基也逐漸走紅,,但許多細胞系未必適用,并且存在費用較高和生長較慢等缺點,。那么,,研究人員在評估FBS的質(zhì)量時,需要考慮哪些標準呢,?
對于細胞培養(yǎng)而言,,血清的重要性不言而喻,。它含有蛋白、生長因子,、氨基酸,、脂類、碳水化合物,、維生素及其他組分,,可以促進貼壁或懸浮細胞的生長和維持。胎牛血清(FBS)是zui常用的血清添加劑,,因為它富含生長因子,、蛋白和大分子。盡管無血清和非動物來源的培養(yǎng)基也逐漸走紅,,但許多細胞系未必適用,,并且存在費用較高和生長較慢等缺點。
目前,,市場上存在著不同等級的FBS,。由于FBS關(guān)乎細胞活力和實驗重復(fù)性等重要的參數(shù),故在質(zhì)量方面是不能含糊的,。若質(zhì)量不穩(wěn)定,,則有可能導(dǎo)致實驗失敗。那么,,研究人員在評估FBS的質(zhì)量時,,需要考慮哪些標準呢?
1.可追溯性
對于科學(xué)家而言,,zui大的風險也許是FBS的純度大打折扣,這可能導(dǎo)致細胞培養(yǎng)實驗的效果不佳,。許多FBS的賣家與多個產(chǎn)地簽訂短期供應(yīng)協(xié)議來采集原材料,,以便降低成本。他們將這些產(chǎn)品混合,,稀釋不同來源的影響,。然而,zui終結(jié)果就是質(zhì)量不穩(wěn)定,,產(chǎn)品供應(yīng)和價格出現(xiàn)波動,。
針對這一問題,血清行業(yè)協(xié)會(ISIA)實施了供應(yīng)鏈可追溯性的行業(yè)標準,,這對確保FBS各個批次的質(zhì)量,、安全性和重復(fù)性起了關(guān)鍵作用。一些公司提供化學(xué)分析,,說明原產(chǎn)國的統(tǒng)計概率,。也許的方法是追溯到動物,,以確保產(chǎn)品的來源。
FBS的供應(yīng)商是否在整個供應(yīng)鏈中都保留原產(chǎn)地的可追溯記錄,?他們是否持有文件,,支持各個階段的處理、運輸和商業(yè)交易,?他們能否展示*來源的可追溯性,,以確保重復(fù)性和低病毒風險?在考慮購買FBS時,,這都是你需要考慮的問題,。
地域性風險評估(GBR)是定性評估一個國家或地區(qū)的動物感染疾病(如瘋牛?。┑目赡苄?。這種方法依賴世界動物衛(wèi)生組織(OIE)的監(jiān)控系統(tǒng),將每個國家或地區(qū)的瘋牛病風險進行分類,。OIE評估各個國家的獸醫(yī)服務(wù),、疾病診斷能力、覺察癥狀能力及其他因素,,以避免瘋牛病的傳播,。
新西蘭和澳大利亞都獲得了GBR 1級,這意味著它們目前是沒有瘋牛病和口蹄疫的,。這兩個國家都是出了名的病毒風險zui低的國家,。由于環(huán)境受到保護,以及嚴格的農(nóng)業(yè)法規(guī)和入境要求,,再加上它們都是島國,,動物們不太可能受到其他地區(qū)疾病的影響。這對于那些敏感的細胞系和實驗而言特別有用,。對科學(xué)家來說,,好處是花在重復(fù)實驗或檢驗新批次上的時間將大大減少。
2.產(chǎn)品質(zhì)量
對血清而言,,產(chǎn)品質(zhì)量尤為關(guān)鍵,。由美國食品和藥品管理局(FDA)執(zhí)行的cGMP規(guī)范建立了完整體系,以確保制造過程和工廠的正確設(shè)計,、監(jiān)控和控制,。在購買血清時,你選擇遵從cGMP規(guī)范的供應(yīng)商,,以便降低產(chǎn)品混合和標簽錯誤的風險,。
確保各批次一致性還涉及其他因素,包括牛群環(huán)境,、食物來源以及質(zhì)量控制檢測程序,。正確采集血清,,才能保證它天然的促進生長特性,并實現(xiàn)FBS產(chǎn)品的出色表現(xiàn),。當然,,這些資料收集起來可不容易,那么你可以依靠*機構(gòu)(如FDA,、USDA,、AQIS等行業(yè)協(xié)會)的認證,來尋找理想的供應(yīng)商,。
3.穩(wěn)定價格
有時,,F(xiàn)BS的價格會大幅波動,這取決于許多因素,。作為肉類行業(yè)的副產(chǎn)品,,F(xiàn)BS的生產(chǎn)在本質(zhì)上會受到天氣和食物供應(yīng)、經(jīng)濟條件和牛群規(guī)模等各種因素的影響,。如果病毒不定期再來搗亂一下,,那么牛的數(shù)量必然下降,F(xiàn)BS的供應(yīng)也勢必減少,。此外,,由于干旱導(dǎo)致奶牛飼養(yǎng)費用較高,農(nóng)民可能會將牛賣掉或屠宰,,導(dǎo)致牛群數(shù)量下降,。
值得一提的是,*對FBS的需求還在不斷增加,。每年,,大約生產(chǎn)600,000 L的FBS,其中cGMP等級的不足200,000 L,,而后者正是大多數(shù)工業(yè)生產(chǎn)公司的要求,。隨著大型制藥公司的需求上升,F(xiàn)BS的價格也在持續(xù)上漲,。此時,找到一家可以提供同批次FBS的供應(yīng)商是十分必要的,,這既確保了產(chǎn)品供應(yīng),,也在一定程度上避免價格波動。
4.產(chǎn)品檢測
定期的產(chǎn)品檢測當然也不能少,。大家應(yīng)注意產(chǎn)品的供應(yīng)商是否定期進行生化,、激素、病毒和功能方面的檢測,,包括檢測細菌,、病毒及其他微生物是否存在,,以確保產(chǎn)品經(jīng)過全面鑒定。質(zhì)量控制檢測也應(yīng)當開展,,以確保血清產(chǎn)品始終符合規(guī)定并合乎規(guī)格,。
總的來說,F(xiàn)BS及其他血清有可能大大影響細胞培養(yǎng)工作的質(zhì)量和重復(fù)性,。因此,,在購買過程中,我們有必要對FBS的身世,、質(zhì)量以及質(zhì)檢過程做到心中有數(shù),,而不僅僅被價格所左右,這樣才能改善實驗結(jié)果,,節(jié)省寶貴時間
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