紫外可見(jiàn)近紅外分光光度計(jì)系數(shù)倍率法

系數(shù)倍率法

（1）系數(shù)倍率法儀器原理（見(jiàn)圖 12） 雙波長(zhǎng)分光光度法中用等吸收點(diǎn)波長(zhǎng)消除干

擾，是測(cè)定兩組分體系的一個(gè)好方法,。但是在干擾組分的吸收光譜中,，找不出等吸收點(diǎn)時(shí)，

就不能用此法消除干擾,。系數(shù)倍率法克服等吸收波長(zhǎng)的局限性,。

系數(shù)倍率法在雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)中增加一個(gè)系數(shù)倍率器（見(jiàn)圖 12），獲得差示信號(hào)與干

擾組分含量無(wú)關(guān),。

⊿A＝Aλ₂－K₁Aλ₁＝kC

式中⊿A――差示吸光度值,；

Aλ₂――樣品溶液在測(cè)量波長(zhǎng) λ₂ 處的總吸光度值；

Aλ₁――樣品溶液在參比波長(zhǎng)處的總吸光度值,；

K₁ ――校正系數(shù),，通過(guò) K₁ 校正扣除了干擾組分吸光度；

K ――標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率,；

C ――樣品溶液待測(cè)組分濃度,。

按著上述原理，可用下式求 K₁ 系數(shù),。

因此,，只要測(cè)出干擾組分在 λ₂ 和 λ₁ 處的吸光度值，便求解 K₁,，實(shí)際上它是對(duì)干擾組

分的校正系數(shù),。K₁ 與干擾組分濃度無(wú)關(guān)，只與 λ₁ 位置有關(guān),。

圖 12：各種吸收光譜的組合及系數(shù)倍率法儀器示意圖

1－光源,；2—單色器；3—切光器,；4—吸收池,；5—光電倍增管；6—初級(jí)放大器,；

7—同步放大器,；8—對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換器；9—系數(shù)倍增器,；10—差算電路,；11—數(shù)字電壓表

（2）舉例

①食品紅 2 號(hào)（R₂）和山梨酸的測(cè)定 由圖 13 可見(jiàn)，為測(cè)定 R₂ 和山梨酸混合樣品兩

組分,，可選山梨酸的 λ_ma_x＝262 nm 為測(cè)定波長(zhǎng) λ₂,，以 320 nm 為參比波長(zhǎng)（λ₁）測(cè)定山梨酸

含量（Aλ₂> Aλ₁，按 2－16 式求 K）,。而以 262 nm 和 240 nm 為組合波長(zhǎng)測(cè)定食品紅 2 號(hào)（R₂）,。

②復(fù)方黃連素注射液中甲氧芐氨嘧啶（TMP）含量的系數(shù)倍率法測(cè)定

硫酸氫黃連素 λ_ma_x＝344 nm,。TMP 的 λ_ma_x＝271 nm，測(cè)：

⊿A₂7₁（TMP）＝A₂7₁－K•A₃44

釋成四種濃度,，分別在 271nm 和 344nm 處測(cè)定吸光度,，并計(jì)算K值。然后在 271nm 和 344nm

處測(cè)定樣品的吸光度值,，求出⊿A₂1₁（TMP）,。可由標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法求出 TMP 含量,。

③ 增效聯(lián)磺膠囊中三組分含量可用雙波長(zhǎng)系數(shù)倍率法測(cè)定增效聯(lián)磺膠囊中含有磺胺

甲基異惡唑（SMZ）、磺胺嘧啶（SD）和甲氧芐氨嘧啶（TMP）,。采用亞硝酸鈉法測(cè)定

 該品中 SMZ,、SD 的磺胺總量和提取分光光度測(cè)定 TMP 的含量，操作較繁,。姚桂棣等

用系數(shù)倍率法,，并借助微機(jī)，可不經(jīng)分離直接測(cè)定各自的含量^[9^],。

分別配制成 SMZ,、SD 的乙醇溶液 10ug/ml 和 TMP 的乙醇溶液 4ug/ml 作對(duì)照液。然

后配制模擬樣品溶液：準(zhǔn)確稱取 SD,、SMZ10mg,，放入 100ml 容量瓶中，加 TMP 乙醇對(duì)照

溶液 20ml,，用乙醇稀至刻度,，取此液中 0.1mol/1HCl 稀釋 10 倍，然后,，以 0.1mol/1HCl 為

參比,，對(duì)上述對(duì)照液和模擬樣品液，以⊿λ0.5nm 間隔,，從 300－220nm 掃描,，求得吸光度值，

經(jīng)微機(jī)處理選出測(cè)點(diǎn)：SMZλ₂4₃/λ₂6₅,，K＝2.267,；SDλ₂3₆/λ₂4₂，K＝1.5381,；TMPλ₂40.₅/λ₂5₀,，

K＝1.1291,。以⊿A＝A₁－KA₂ 為縱坐標(biāo)，λ 為橫坐標(biāo)作圖（見(jiàn)圖 15）,。當(dāng)以 236nm 為測(cè)定波

長(zhǎng),，則⊿A 只與 SD 濃度有關(guān)，可測(cè)定之,。同理可測(cè)定 SMZ 和 TMP,。增效聯(lián)磺膠囊同樣配

成乙醇溶液，將樣品液和對(duì)照液在 λ₂3₆/λ₂4₂,、λ₂4₃/λ₂6₅,、λ₂40.₅/λ₂5₀ 處測(cè)其吸光度值，并計(jì)算各

組分含量,。

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