產(chǎn)品名稱：NADP蘋果酸酶（NADP-ME）測試盒說明書

規(guī)格 : 50管/48樣,、100管/96樣

測試方法:微量法,、紫外分光光度法

貨號：YS-01S6339

測定意義

ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞,、動物和植物胞漿中,，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),，產(chǎn)生丙酮酸和CO2,，以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng)，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶,。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān),。近年來植物ME活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn),。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同,，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

測定原理：

NADP-ME催化NADP+還原成NADPH,，在340nm下測定NADPH增加速率,。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋,、臺式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用,，不得用于人體臨床直接檢測,。避免給您帶來不必要的損失，請仔細(xì)閱讀購買說明,！

樣品制備：

1）. 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,，體積可達(dá)2.000ml。

2）. 過濾混濁溶液,。

3）. 除去樣品中的CO 2 ,。

4 ）. 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,，孵育約15分鐘,。

6 ）. 用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品,。

8 ）. 壓碎,、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取,。

9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白,。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前,，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）,；試劑或樣品稀釋時，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡,。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時,，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘,。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,，甩干,，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制）,，酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘,。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘,，大約400μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl,，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘,。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi),，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）,。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng),，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液,。

特點(diǎn):

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法,。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步,。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬,。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法,。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測定,如鈷,、鈾、鎳,、銅,、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了,。

(4)準(zhǔn)確度高

對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾,。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。

(6)分析成本低,、操作簡便,、快速

Anti-PDGF-BB/FITC 熒光素標(biāo)記血小板源性生長因子-BB抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rabbit Anti- guinea pig IgM/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗豚鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml

死亡受體4抗體 Anti-DR4/APO2/TRAILR1 0.1ml

Rabbit Anti-horse IgM/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml

FBXO7 英文名稱： F-box蛋白家族FBXO7抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Torc1/Crtc1 (Ser151) 磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit Anti- guinea pig IgM/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗豚鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml

SIP1 peptide 運(yùn)動神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-Bim 細(xì)胞死亡調(diào)解子抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PGGT1A/FNTA 蛋白香葉烯基轉(zhuǎn)移酶1α抗體 規(guī)格 0.2ml

Flt-1/VEGFR1 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝

Urocortin 3 英文名稱： 尿皮質(zhì)素UCN3抗體 0.1ml

CCL24 英文名稱： 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白24抗體 0.2ml

Anti-Bim 細(xì)胞死亡調(diào)解子抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

phospho-SYN1(Ser549) 英文名稱： 磷酸化神經(jīng)突觸素1抗體 0.1ml

Ephrin B 英文名稱： Ephrin B抗體 0.1ml

轉(zhuǎn)錄因子7類似物2抗體 anti-TCF7L2 0.2ml

Anti-Phospho-TLK1 (Ser695)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化調(diào)節(jié)染色體組裝激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-LKB1(Ser334) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體 規(guī)格 0.1ml

NT-3 神經(jīng)生長因子-3(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
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