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產(chǎn)品名稱(chēng)：比色法試劑盒

規(guī)格：50管/24樣,、100管/48樣

測(cè)試方法：微量法,、可見(jiàn)分光光度法

測(cè)定意義：

LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動(dòng)物、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),，伴隨著NAD+/NADH之間互變,。

測(cè)定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,，在堿性溶液中顯棕紅色,，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、恒溫水浴鍋,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽、冰和蒸餾水,。

樣品制備：

1）直接或稀釋使用清亮無(wú)色中性液體樣品,，體積可達(dá)2.000ml。

2）過(guò)濾混濁溶液,。

3）除去樣品中的CO2 ,。

4 ）加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0,。

5 ）調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘,。

6 ）用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）,。

7 ）用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ）壓碎,、攪勻固體或半固體樣品,，用水溶解提取。

9 ）用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白,。

10）含脂肪的樣品用熱水提取,。

特點(diǎn)

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見(jiàn)區(qū)都有吸收，因此均可借此法加以測(cè)定,。到目前為止,，幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,，使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,，從而對(duì)元素測(cè)定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,，使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來(lái)的幾萬(wàn)提高到幾十萬(wàn),。相對(duì)于其它痕量分析方法而言，光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致是比較高的,。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,，在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中，它更受重視,，很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法,。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定，如鈷,、鈾,、鎳、銅,、銀,、鐵等元素的測(cè)定，已有比較滿(mǎn)意的方法了,。

(4)準(zhǔn)確度高

對(duì)于一般的分光光度法來(lái)說(shuō),其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),，如采用示差分光度法測(cè)量，則誤差往往可減少到千分之幾,。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后),。

(6)分析成本低、操作簡(jiǎn)便,、快速,。

比色法試劑盒操作步驟：

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí),，均需混勻,，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,，如樣品濃度過(guò)高時(shí),，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，37℃反應(yīng)120分鐘,。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。

2. 棄去液體,，甩干，不用洗滌,。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制）,，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃反應(yīng)60分鐘,。

3. 溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板3次,，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。

4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘,。

5. 溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體,，甩干，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。

6. 依序每孔加底物溶液90μl,，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯,，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應(yīng),，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。