【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測,。避免給您帶來不必要的損失,，請仔細(xì)閱讀購買說明！

產(chǎn)品名稱：酶活分光光度試劑盒

規(guī)格 : 50管/24樣,、100管/48樣

測試方法：微量法,、可見分光光度法

測定意義：

LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),，伴隨著NAD+/NADH之間互變,。

測定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,，在堿性溶液中顯棕紅色,，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、恒溫水浴鍋,、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽、冰和蒸餾水,。

樣品制備：

1）直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,，體積可達(dá)2.000ml。

2）過濾混濁溶液,。

3）除去樣品中的CO2 ,。

4 ）加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ）調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,，孵育約15分鐘,。

6 ）用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。

7 ）用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品,。

8 ）壓碎,、攪勻固體或半固體樣品,，用水溶解提取。

9 ）用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白,。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取,。

特點:

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收，因此均可借此法加以測定,。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法,。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展，使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,，從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步,。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究，使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬,。相對于其它痕量分析方法而言,，光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用,，在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,，它更受重視，很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法,。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測定,，如鈷、鈾,、鎳,、銅、銀,、鐵等元素的測定,，已有比較滿意的方法了。

(4)準(zhǔn)確度高

對于一般的分光光度法來說,，其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),，如采用示差分光度法測量，則誤差往往可減少到千分之幾,。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后),。

(6)分析成本低、操作簡便,、快速,。

酶活分光光度試劑盒操作步驟：

實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）,；試劑或樣品稀釋時,，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,，如樣品濃度過高時,，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。

2.棄去液體，甩干,，不用洗滌,。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜,，37℃反應(yīng)60分鐘,。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘,，大約400μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl,，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘,。

5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘,，350μl/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi),，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）,。

7.依序每孔加終止溶液50μl,，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色,。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液,。