實驗過程：
一、貓杯狀病毒前病毒探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2．產品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,，而不能從無到有，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設計的引物,。可以是DNA也可以是RNA,，一般20多bp,，需要根據你的模板鏈設計。因此,，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM
5．Taq酶
二,、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min,，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次,，后在72℃ 保溫7min,。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測。
參數規(guī)格：
產品名稱：貓杯狀病毒前病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Feline Calicivirus(FCV)
產品規(guī)格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品,。
運輸及保存
低溫運輸,，-20℃保存，保存期限一年,。
自備試劑
DNA模板,、10×ROX（根據機型決定，具體見使用方法）,。
本產品只適用于科研,，不能用于臨床診斷。

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產品及特點：
1. 即開即用,，用戶只需要提供病毒樣品,。
2. 根據鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應,。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應,。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染,。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR,。
以下是公司正在熱銷的產品：
Strongyloides spp.類圓線蟲通用LAMP試劑盒非模式菌株分析檢測革蘭氏陰性細菌，菌體桿狀周生鞭毛運動；兼性厭氧,，發(fā)酵代謝,。檢測濾膜(0.45μm)對細菌的阻留效果

Strongylus vulgaris 尋常圓線蟲LAMP試劑盒非模式菌株分析檢測革蘭氏陰性細菌，單極毛運動,，好氧生長,，呼吸代謝。檢查濾膜(0.22μm)對細菌的阻留效果

Subulura brumpti布氏錐尾線蟲LAMP試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細菌,，形成芽孢,，厭氧生長。模式菌株,；產生乙酸和丁酸

Sudan Ebola Virus(SEBOV)蘇丹埃博拉病毒RT-LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,，菌體桿狀，發(fā)酵代謝葡萄糖主要產生乳酸,。酸奶

Suid Herpesvirus-1(SuHV-1)豬皰疹病毒 I 型LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,，形成芽孢。

Swine Enteric Alphacoronavirus(SeACoV)豬腸道甲型冠狀病毒RT-LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌,，自生固氮,。細菌肥料

Swine Papillomavirus豬乳頭瘤病毒LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng),，呼吸和發(fā)酵代謝,。

Swine Poxvirus(SWPV)豬痘病毒LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng),，呼吸和發(fā)酵代謝,。

Swine Vesicular Disease Virus(SVDV)豬水泡病病毒RT-LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng),，兼性厭氧,，發(fā)酵代謝。

Syngamus trachea氣管比翼線蟲LAMP試劑盒模式菌株分類革蘭氏陰性細菌,，化能異養(yǎng),，兼性厭氧，發(fā)酵代謝,。模式菌株

Tacaribe Virus(TCRV)塔卡里伯病毒RT-LAMP試劑盒模式菌株分類,；分析檢測革蘭氏陽性細菌，菌體桿狀,，發(fā)酵代謝葡萄糖主要產生乳酸,。Type strain, Assay of alanine and pyridoxal

Taenia saginata肥胖帶絳蟲LAMP試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細菌，菌體桿狀,，發(fā)酵代謝葡萄糖主要產生乳酸,。模式菌株

Taenia solium鏈狀帶絳蟲LAMP試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細菌,，菌體桿狀，發(fā)酵代謝葡萄糖主要產生乳酸,。模式菌株

Taenia spp.帶絳蟲通用LAMP試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細菌,，菌體桿狀，發(fā)酵代謝葡萄糖主要產生乳酸,。模式菌株

Tai Forest Ebola Virus(TAFV)大森林埃博拉病毒RT-LAMP試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細菌，菌體桿狀,，發(fā)酵代謝葡萄糖主要產生乳酸,。Type strain;
貓杯狀病毒前病毒探針法熒光定量PCR試劑盒Tom40抗體　Tom 40 Antibody，C19orf1,，D19S1177E,，PER-EC1，PEREC1 ,，TOM40,，p38.5

Toll樣受體接頭分子2　TCAM2 Polyclonal Antibody

Toll樣受體9　TLR9 Polyclonal Antibody

Toll樣受體5　TLR5 Polyclonal Antibody

TNF受體關聯(lián)因子7　TRAF7 Polyclonal Antibody

TNF-R1抗體　TNF-R1 Antibody，TNF-R1,，Tumor Necrosis Factor type I,，TNFRSF1A，TNFAR,，TNF-R55,，TNFR60，p55,，CD120a

TNF-R1抗體　TNF-R1 Antibody,，TNF-R1，Tumor Necrosis Factor type I,，TNFRSF1A,，TNFAR，TNF-R55,，TNFR60,，p55，CD120a

TNF-beta抗體　TNF-beta Antibody,，TNF-b,，TNF b，TNFbeta,，tnf,，tumor necrosis factor，tumor necorsis factor beta,，TNF superfamily member 2,，Lymphotoxin-alpha,； LT-alpha； TNF-beta,； Tumor necrosis factor lig

TNF-alpha抗體　TNF-alpha Antibody,，TNF，TNFSF2,，cachectin,，DIF，TNFA,，TNF-alpha
使用方法：
一,、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照,。
2. 標記6個離心管，分別為7,，6,，5，4,，3,，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）,。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用。
5. 換槍頭,，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用,。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,，充分震蕩1分鐘,，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用,。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用,。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,，必須設置N+2個提取,，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）,?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL,，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為PC。另外用水作為NC,。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL,。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三,、設置qPCR反應（20 μL體系,，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復,，則標記N+9個PCR管,，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,，1個用于PCR陰性對照,，6個用于PCR陽性對照,。如果做2-3次重復,，則反應設置數量相應增加2或3倍,。
11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復,。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好,。