實(shí)驗(yàn)過程：

一,、巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準(zhǔn)備

1.DNA模板

2.產(chǎn)品僅用于科研對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無到有,，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM

5.Taq酶

二,、操作步驟

1.在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer： 5μl

dNTP mixl：4μl

引物1（10pM）：2μl

引物2（10PM）：2μl

Taq酶（2U/μl）：1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）：1 μl

加ddH2O至：50μl

視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。

2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，后在72℃保溫7min,。

3.結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4.PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測(cè),。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱：Nocardia brasiliensis

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量PCR產(chǎn)品

運(yùn)輸及保存：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存,，保存期限一年,。

自備試劑

DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定,，具體見使用方法）,。

本產(chǎn)品只適用于科研,，不能用于臨床診斷。


產(chǎn)品及特點(diǎn)：

1. 即開即用,，用戶只需要提供病毒樣品,。

2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng),。

3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng),。

4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè)，避免后續(xù)污染,。

5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR,。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

二甲四(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 MCPA

MBP(Myelin Basic Protein, MBP)peptide  髓鞘堿性蛋白(多肽抗原)現(xiàn)貨供應(yīng)可溶性瘦素受體檢測(cè)試盒1gHuman/人Elisa試盒4903360

阿曼托黃6HEX 亞酰5mg

油甲酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.0%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.0%(GC) Methyl oleate

NPY ( Neuropeptide Y)136  神經(jīng)肽 Y（136多肽）進(jìn)口、分裝愛潑斯坦?fàn)柌摲さ鞍?A檢測(cè)試盒5gHuman/人Elisa試盒4906245

鹽去駱駝蓬堿 CAS號(hào)： 343271 規(guī)格： HPLC≥98%; 20mg 訂購(gòu)|咨詢

右旋四巴馬汀 CAS號(hào)： 3520147 規(guī)格： HPLC≥98%; 20mg 訂購(gòu)|咨詢

原百部次堿 CAS號(hào)： 169534854 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購(gòu)|咨詢

原百部堿 CAS號(hào)： 27495405 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢

雅姆皂苷元 CAS號(hào)： 512061 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購(gòu)|咨詢

3南美楝屬二 CAS號(hào)： 35833626 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購(gòu)|咨詢

酰二美味草素A CAS號(hào)： 94285220 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購(gòu)|咨詢

羽扇 CAS號(hào)： 1617705 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢

葉綠 CAS號(hào)： 150867 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢

鹽堿 CAS號(hào)： 3738703 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購(gòu)|咨詢

異甜菊 CAS號(hào)： 27975195 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢

野鷲尾苷 CAS號(hào)： 491747 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢

3酰11乳香 CAS號(hào)：  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢

3酰乳香 CAS號(hào)：  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢

使用方法：
一,、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,，只提供可以直接使用的DN段作為陽(yáng)性對(duì)照,。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7,，6,，5，4,，3,，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）,。
4. 在7號(hào)管中加入5μL 1×10E8拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用。
5. 換槍頭,，在6號(hào)管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。
6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中,，充分震蕩1分鐘,，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,，必須設(shè)置N+2個(gè)提取,，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）,?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL,，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為PC。另外用水作為NC,。如果每次制備需要200μL樣品,，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒提取試劑盒兼容,。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20μL體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù),，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍,。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好,。