PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

【產(chǎn)品名稱】問號(hào)鉤端螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Leptospira interrogans
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP6886
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè),，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀，可通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分,。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),，針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對(duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè),。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率,。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因,，與同類產(chǎn)品相比,，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高,。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
問號(hào)鉤端螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存,。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè),。
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體,，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體,。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果,。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增,。
實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火,；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增,。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈,；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短,；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈,。
非模式菌株aIgG英文名稱: Rabbit anti-Pig IgG儲(chǔ)存條件: -20°C分子式：C22H19NO5性狀：Powder純度：98.0%
小鼠抗羊IgG英文名稱: Goat anti-Equine IgG/HRP單位: 支分子式：C34H43NO10性狀：Powder純度：96.5%
羊抗大鼠IgG英文名稱: Goat anti-Human serum儲(chǔ)存條件: -20°C分子式：C33H47NO10性狀：Powder純度：97.0%
羊抗雞IgG英文名稱: Rabbit anti-Chicken IgG 保存: -20℃分子式：C5H4N4O性狀：Powder純度：99.0%
羊抗牛IgG英文名稱: Rabbit anti-HRP 儲(chǔ)存條件:  -20°C分子式：C35H49性狀：Powder純度：98.0%
羊抗人IgG英文名稱: Goat anti-Mouse IgG/RBITC儲(chǔ)存條件: -20°C分子式：C37H51NO12性狀：Powder純度：97.5%
羊抗人IgM英文名稱: Goat anti-Mouse IgG/Biotin儲(chǔ)存條件: -20°C分子式：C22H26N2O3性狀：Powder純度：98.0%
羊抗兔IgG英文名稱: Rabbit anti-Human IgG-Fc儲(chǔ)存條件: -20℃分子式：C39H46N2O8性狀：Powder純度：97.0%
羊抗豚鼠IgG英文名稱: Rabbit anti-Equine IgG儲(chǔ)存條件: -20℃分子式：C31H28N2O7性狀：Powder純度：96.5%
羊抗小鼠IgG英文名稱: Rabbit anti-Rat IgG保存: -20℃分子式：C19H22N2O3性狀：Powder純度：97.0%
羊抗小鼠IgM英文名稱: Rabbit anti-Avidin 儲(chǔ)存條件: -20°C分子式：C20H23N3O性狀：Powder純度：95.0%
Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗人IgG英文名稱: Horse IgG儲(chǔ)存條件: -20℃分子式：C31H43NO7性狀：Powder純度：96.0%
Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗兔IgG英文名稱: Goat anti-Pig IgG保存: -20°C分子式：C31H43NO8性狀：Powder純度：97.5%
Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG英文名稱: Rabbit anti-Biotin 儲(chǔ)存條件: -20°C分子式：C30H41NO7性狀：Powder純度：97.0%
Alexa Fluor 555標(biāo)記的驢抗羊IgG英文名稱: Rabbit anti-Human Fibrinogen儲(chǔ)存條件: -20°C分子式：C29H39NO7性狀：Powder純度：98.5%
Alexa Fluor 555標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體英文名稱: Rabbit anti-Biotin/HRP 儲(chǔ)存條件: -20°C分子式：C43H52N4O5性狀：Powder純度：97.0%    Norchelerythrine特異性: 人ADFP/ADRP mRNA原位雜交試劑盒
Aspyridone A特異性: 大鼠Adora1 mRNA原位雜交試劑盒
Bryonamide A特異性: 人,、大鼠、小鼠ADM mRNA原位雜交試劑盒
1-(3,4,5-Trihydroxypentanoyl)-β-carboline特異性: 大鼠ADRA1 mRNA原位雜交試劑盒
Flazin特異性: 大鼠Adora2b mRNA原位雜交試劑盒
Norsanguinarine特異性: 大鼠ADRA2 mRNA原位雜交試劑盒
Thymine特異性: 大鼠,、小鼠Adora2a mRNA原位雜交試劑盒
Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗大鼠IgG英文名稱: Goat anti-Human albumin儲(chǔ)存條件: -20℃分子式?子菌類酵母菌,。
問號(hào)鉤端螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒Mas相關(guān)G蛋白偶聯(lián)受體X2　MRGX2 Polyclonal Antibody

Mas相關(guān)G蛋白偶聯(lián)受體D　MRGRD Polyclonal Antibody

MARVEL蛋白家族D2　MALD2 Polyclonal Antibody

MART-1抗體　MART-1 Antibody，Melanoma antigen recognized by T-cells 1,； MART-1,； Protein Melan-A； Antigen SK29-AA,； Antigen LB39-AA

MARCKS相關(guān)蛋白　MRP Polyclonal Antibody

MAPKAPK-2抗體　MAPKAPK-2 Antibody,，MAPKAPK2，MK2

MAP3k混合譜系酶3(phosphoSer674)　MLK3 (phospho Ser674) Polyclonal Antibody

MAP3K12結(jié)合抑制蛋白1　MBIP1 Polyclonal Antibody

MAP-1抗體　MAP-1 Antibody,，MAP1,，MAP1A，MAP1L，MTAP1A,，F(xiàn)LJ77111