PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

【產(chǎn)品名稱】鳥分枝桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
【英文名稱】Mycobacterium avium
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP6947
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè),，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀,，可通過(guò)實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),，針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針,，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針?lè)ǎ?duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè)。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率,。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板,，擴(kuò)增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比,，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng),，擴(kuò)增效率更高。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
鳥分枝桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，在72℃ 保溫7min,。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果,。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體,，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體,。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1,。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性,。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果,。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增,。
實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板,；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),，通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈,；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸,，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
Astragaloside中性粒細(xì)胞趨化蛋白2檢測(cè)試劑盒20mg

柚皮苷二氫查爾 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,，標(biāo)準(zhǔn)品 Naringin dihydrochalcone

普列克底物蛋白同源物樣域家族A成員2(PHLDA2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 GYPA / CD235a / Glycophorin A 蛋白 (His 標(biāo)簽)*250(g)

Human Nephrin ELISA Kit  人病蛋白CAS號(hào)：112630 亞精胺檢測(cè)試盒50THuman/人Elisa試盒3034557

Puerarin中性內(nèi)肽酶/腦啡肽酶檢測(cè)試劑盒20mg

 小鼠白血病細(xì)胞英文名稱：M1

基質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP12)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 RAB27B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)*100(g)

人白介素18（IL18)ELISA試盒ROC1/RNF75  環(huán)指蛋白75抗體規(guī)格:96T/48TAlbuterol Related Compound A規(guī)格:500mgBcl2相關(guān)X蛋白檢測(cè)試盒20mg人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,，NCIH1299細(xì)胞1x10^6cells

95%1g5ml高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)檢測(cè)試劑盒(PTAMg比色法)coagulation factor XIII A

鈮標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml) 質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml Niobium standard PA319(人大腸細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

Maconkey Agar No.2250血管生成素樣蛋白4檢測(cè)試盒5mg載脂蛋白A1檢測(cè)試盒αSmoothmuscleactin

97%5g25ml高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)檢測(cè)試劑盒(PTAMg比色法)Legionella IgM antibody

磺間二嘧啶;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 規(guī)格： 0.1g 訂購(gòu)|咨詢 SMMC-7221全細(xì)胞裂解液100ug100ug

Maconkey Agar No.3250酰肽受體1檢測(cè)試盒5mgα平滑肌肌動(dòng)蛋白檢測(cè)試盒Fibronectin

97%25g100ml高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)檢測(cè)試劑盒(過(guò)化物酶比色法)proenkephalin

羅漢果苷V  英文名稱：Mogroside V   保存：-20℃   規(guī)格：20mg 多調(diào)制因子結(jié)合蛋白1抗體

Alkaline Agar250蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)子7檢測(cè)試盒5mg纖連蛋白檢測(cè)試盒CollagenTypeⅠ
鳥分枝桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒金剛;Adamantane CAS號(hào)： 281232 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

京尼平苷;Geniposidic ac CAS號(hào)： 27741011 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

金石蠶苷;Poliumoside CAS號(hào)： 94079819 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

桔梗皂苷D;Platycodin D CAS號(hào)： 58479688 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

金絲桃苷;Hyperoside CAS號(hào)： 482360 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

雞II型膠原蛋白; CAS號(hào)：  規(guī)格： 10mg 訂購(gòu)|咨詢

L精氨;L(+)Arginine CAS號(hào)： 74793 規(guī)格： 100mg 訂購(gòu)|咨詢

積雪草;Asiatic acid CAS號(hào)： 464926 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

金雀花堿;Cytisine CAS號(hào)： 485358 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

姜黃素;Curcumin CAS號(hào)： 458377 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

雌;Diethylstilbest CAS號(hào)： 56531 規(guī)格： 100mg 訂購(gòu)|咨詢

菊苣;Cichoric acid CAS號(hào)： 70831560 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

絞股藍(lán)皂苷XLIX;Gypenoside CAS號(hào)： 94987083 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

絞股藍(lán)皂苷;Gynostemma Pen CAS號(hào)： 15588688 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢

5O維斯阿米苷;5OMet CAS號(hào)： 84272855 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢