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參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號50T
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
所 在 地上海市
更新時間:2020-09-29 11:32:48瀏覽次數(shù):347次
聯(lián)系我時,,請告知來自 化工儀器網(wǎng)CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
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分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
貨號 | YSP7031 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:細(xì)刺奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Ostertagia leptospicularis
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品,。
運輸及保存
低溫運輸,,-20℃保存,保存期限一年,。
自備試劑
DNA模板,、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,,具體見使用方法)。
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,,用戶只需要提供病毒樣品,。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng),。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng),。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染,。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR,。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷,。?
實驗過程:
一,、細(xì)刺奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無到有,,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物,??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計,。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二,、操作步驟
1.在冰浴中,,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油,。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min,。
3.結(jié)束反應(yīng),,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油,;否則,直接取5-10μl電泳檢測,。
使用方法:
一,、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,,只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照,。
2. 標(biāo)記6個離心管,分別為7,,6,,5,4,,3,,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,,下同),。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用,。
5. 換槍頭,,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用。
6. 換槍頭,,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用,。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用,。
二,、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),,一個是NC(樣品制備陰性對照),。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC,。另外用水作為NC,。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL,。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三,、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個PCR管,,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照,。如果做2-3次重復(fù),,則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù),。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。
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