實(shí)驗(yàn)過程：
一,、圓弧青霉探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有,，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA,，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM
5．Taq酶
二,、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次,，后在72℃ 保溫7min,。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：圓弧青霉探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Penicillium cyclopium
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品,。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,，-20℃保存，保存期限一年,。
自備試劑
DNA模板,、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）,。
本產(chǎn)品只適用于科研,，不能用于臨床診斷。

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產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用,，用戶只需要提供病毒樣品,。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng),。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng),。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR,。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Dihydrocapsaicin型肝炎病毒e抗體檢測試劑盒10mg

 含卷螺旋域蛋白3(CCDC3)重組蛋白英文名稱：Recombinant Coiled Coil Domain Containing Protein 3 (CCDC3)

腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 CHN1 / Chimerin 1 蛋白*250(g)

OTF2B(Human octamer transcription factor 2B) ELISA Kit  人八聚體轉(zhuǎn)錄子CAS號：129584脯氨脫氫酶檢測試盒250UHuman/人Elisa試盒31027313

Capsaicin型肝炎病毒e抗原檢測試劑盒10mg

金雀花堿,野靛堿 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR Cytisine

轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 CHN1 / Chimerin 1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)*250(g)

OTF2A(Human octamer transcription factor 2A) ELISA Kit  人八聚體轉(zhuǎn)錄子CAS號：102767317 △1咯啉5羧合成酶檢測試盒250mgHuman/人Elisa試盒37022

98%5g250mgL氨基化酶Phosphokinase 1

百蕊草素I;Kaempeerol-3-O 訂購|咨詢 規(guī)格： 20mg 化三腺苷依賴解旋酶ddx5抗體 EXOSC5 ELISA Kit 外切酶體成分5(EXOSC5)ELISA試劑盒

5LOX (5lipoxygenase)  5脂氧合酶抗原進(jìn)口、分裝谷胱甘肽過氧化物酶檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒496128

99%25g1gL氨基化酶βglucosidase

鈉十二水 質(zhì)量規(guī)格：>98%,AR Sodium phosphate, tribasic, dodecahydrate 人成骨肉瘤細(xì)胞英文名稱：MG-63

ApoE (Apolipoprotein E)  載脂蛋白E（抗原）進(jìn)口,、原裝完整的成纖維細(xì)胞生長子23檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒4961404

99%1g1gL氨基化酶Serine/threonineprotein kinase DCLK1

外消旋布洛芬酰 質(zhì)量規(guī)格：國進(jìn)口 rac-Ibuprofen Amide FaDu(人咽鱗細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

血粉蛋白胨BR景天庚糖二酶檢測試盒20mg谷胱甘肽檢測試盒Glutathioneperoxidase
圓弧青霉探針法熒光定量PCR試劑盒葉 CAS號： 59303 規(guī)格： HPLC≥98%;100mg 訂購|咨詢

野黃芩素 CAS號： 529533 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

氧前胡素 CAS號： 737520 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

煙 CAS號： 59676 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

熊去氧膽 CAS號：  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

新補(bǔ)骨脂異黃 CAS號： 41060155 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

L纈氨 CAS號： 72184 規(guī)格： HPLC≥98%;200mg 訂購|咨詢

苷 CAS號： 58617 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

維生素K1 CAS號： 84800 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

維生素E CAS號： 10191410 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

維生素D3 CAS號： 67970 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

維生素D2 CAS號： 50146 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

維生素C CAS號： 50817 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

維生素B6 CAS號： 58560 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

維生素B2 CAS號： 83885 規(guī)格： HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢
使用方法：
一,、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照,。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7,，6,，5，4,，3,，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭,，下同）,。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用。
5. 換槍頭,，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照,。放冰上待用,。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,，充分震蕩1分鐘,，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用,。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照,。放冰上待用。
二,、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,，必須設(shè)置N+2個(gè)提取,，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）,?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL,，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為PC。另外用水作為NC,。如果每次制備需要200μL樣品,，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容,。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù),，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,，1個(gè)用于PCR陰性對照,，6個(gè)用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍,。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好,。