PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

【產(chǎn)品名稱】普雷沃菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Prevotella spp.
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP7104
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè),，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀，可通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分,。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),，針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對(duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè),。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率,。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因,，與同類產(chǎn)品相比,，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高,。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
普雷沃菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min,。
3：結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果,。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因,，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體,，優(yōu)選地為TA cloning載體,，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示,。所述的等比例較佳地為1：1,。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性,。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板,；
（2）引物與模板退火,；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng),，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增,。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短,；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸,，合成DNA的新互補(bǔ)鏈,。
98%500mg1g6α羥基豬苓C14259462liver specific lipoprotein

齊墩果(高純98%） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,，BR Oleanolic acid

epimedin C阿奇霉素鑒別混合物標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人腺苷脫氨酶樣蛋白(Adenosine deaminase-like protein)Polyclonal Antibody 0.2ml

CNR1(Human cadherlnrelated neuronal receptor1) ELISA Kit  人鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1CAS號(hào)：2228777γ氨基丁轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)試盒10gHuman/人Elisa試盒313546166

97%100mg5mg二齒孔heparin associated antibody

 RT4(人膀胱移行細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

Lovastatin阿奇毒素相關(guān)物質(zhì)H標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格：規(guī)格：人細(xì)胞骨架活性調(diào)節(jié)蛋白(ARC)Polyclonal Antibody 0.2ml

ATM(Human Ataxia telangiectasia mutated) ELISA Kit  人毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變基CAS號(hào)：2139900葡萄糖焦化酶檢測(cè)試盒1gHuman/人Elisa試盒31362502

99%500g250mg半纖維素酶Mdm2 p53 Binding Protein Homolog

特丁通(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 Terbumeton

ERAlpha peptide  雌激素受體（多肽抗原）*去酰化酶Sirtuin1檢測(cè)試盒100gHuman/人Elisa試盒498942

98%500g1g半纖維素酶Kisspeptin

 弧菌顯色培養(yǎng)基/Vibrio Chromogenic Medium用于弧菌的顯色培養(yǎng),，副溶血性弧菌顯藍(lán)色,，其他弧菌顯無色1升國產(chǎn)/進(jìn)口

TIMP1(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase1)  金屬蛋白酶組織抑制子1（抗原）進(jìn)口、分裝去?；窼irtuin1檢測(cè)試盒500gHuman/人Elisa試盒498953

98%100g1ml半纖維素酶Human TlymphotropicvirusⅠ antibody

噻呋酰(分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%) 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,96% Thifluzamide

ERAlpha/ Beta Estrpgen Receptor Alpha/ Beta  雌激素受體（抗原）進(jìn)口,、原裝組蛋白去酰化酶1檢測(cè)試盒25gHuman/人Elisa試盒498953
普雷沃菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒原花青素 CAS號(hào)： 4852226 規(guī)格： UV≥95%;20mg 訂購|咨詢

柚皮素 CAS號(hào)： 480411 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

柚皮苷 CAS號(hào)： 10236472 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

羊藿苷 CAS號(hào)： 489327 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

延胡索素 CAS號(hào)： 10097844改成 6024857 規(guī)格： 滴定法≥98%;20mg 訂購|咨詢

對(duì)香豆 CAS號(hào)： 501984 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

香素 CAS號(hào)： 91645 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

辛弗林 CAS號(hào)： CAS:94075 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

熊果苷 CAS號(hào)： 497767 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

熊果 CAS號(hào)： 77521 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

天麻素 CAS號(hào)： 62499278 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

甜菊苷 CAS號(hào)： 57817897 規(guī)格： HPLC≥95%;20mg 訂購|咨詢

鹽甜菜堿 CAS號(hào)： 590465 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

甜菜堿 CAS號(hào)： 107437 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

鼠李糖 CAS號(hào)： 6155357 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢