腫瘤細胞用RNA指導的CRISPR-Cas9系統(tǒng)能夠的切割掉特定位置的DNA,，避免了傳統(tǒng)RNAi技術中出現(xiàn)的不能*敲除既定基因或者脫靶效應問題。利用該項技術,，不僅能夠實現(xiàn)*敲除細胞既定基因的目的,，還能夠隨意改變細胞核苷酸的序列,，甚至能夠編輯原代鼠源細胞的基因組,。因此,，利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)靶向敲除原代人源細胞特定基因，為人類多種疾病中某個或者多個基因功能的研究,，進一步確定致病的分子機制提供了一個十分強大的研究途徑,。然而,，由于原代上皮細胞自身具有較低的轉染效率，而用傳統(tǒng)方法分離得到的原代細胞本身細胞數(shù)量就比較少,，因此經過CRISPR-Cas9系統(tǒng)有效編輯的細胞得率就更低，如何使得到的目的細胞傳代增殖從而得到大量該類細胞,，是該項技術將來研究基因功能和疾病臨床治療中廣泛應用的關鍵,。
   細胞條件重編程（CR）技術能夠使上皮細胞在不改變任何基因型,，保留上皮細胞*性狀的前提下使其突破生命的極限，實現(xiàn)原代上皮細胞在體外持續(xù)傳代培養(yǎng)的目的,。
   發(fā)表在Gene Therapy上的一篇研究就將CRISPR-Cas9和CR的結合在一起,。該研究團隊利用慢病毒轉染策略解釋了CRISPR-Cas9的工作機制,。該慢病毒載體同時表達sgRNA，Cas-9核酸酶以及嘌呤霉素,。gRNA直接靶向結合MUC18起始密碼子下游的Cas9，靶向結合該位點會激活異源末端結合的雙鏈斷裂修復機制,，該機制會導致閱讀框密碼子的隨機插入和刪除,，從而實現(xiàn)“敲除”功能性MUC18蛋白的目的；再將經過慢病毒載體轉染的細胞接種在具有嘌呤霉素抗性的滋養(yǎng)層細胞上篩選成功編輯的細胞,。*個供體細胞接種密度為1-3.2x104/100mm,，前后經過39天的時間完成了該項篩選工作,；而第二個供體細胞接種密度為0.5-2.5x105/100mm,，前后僅用8天時間即完成了篩選,，得到95.6%經過編輯的細胞。通過PCR實驗驗證,，在CR細胞培養(yǎng)技術下,，該團隊得到了大量MUC18 KO（5個不同基因刪除和1個基因插入）的細胞群體,，并且發(fā)現(xiàn)這些腫瘤細胞中77%的閱讀框存在5個堿基的缺失，該團隊認為這一現(xiàn)象說明雙鏈斷裂修復過程可能比較青睞于這種刪除效應,。研究人員用不同TLRs激活劑感染2D和ALI 3D培養(yǎng)的MUC18 kO細胞,，來模擬細菌和病毒對肺部造成感染,，該研究團隊發(fā)現(xiàn)了病原體感染后MUC18基因在呼吸道上皮細胞中的促炎作用。
≥95.0%    規(guī)格:        *：    Farrerol    杜鵑素    
≥98%    規(guī)格:        *：    Tiliroside    椴樹苷    
≥98%    規(guī)格:        *：    Ethyl p-hydroxybenzoate    對羥基苯甲酸乙酯    
≥98%    規(guī)格:        *：    P-Coumaric acid    對香豆酸    
≥97%    規(guī)格:        *：    tuberostemonine    對葉百部堿    
≥98%    規(guī)格:        *：    Docetaxel    多烯紫杉醇    
≥98%    規(guī)格:        *：    Curdione    莪二酮/莪術二酮
 腫瘤細胞