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腫瘤細胞在培養(yǎng)過程中如果環(huán)境不適合其生長就會出現(xiàn)部分細胞的老化現(xiàn)象,。這是干細胞培養(yǎng)的一個難點也是經(jīng)常出現(xiàn)的問題。本文描述干細胞老化時出現(xiàn)的跡象,,以及其預(yù)防措施,。
干細胞老化的表現(xiàn)
★ 細胞胞漿內(nèi)特別是在核區(qū)附近出現(xiàn)黑色顆粒,表示細胞開始出現(xiàn)老化,;
★細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡,,則表明該細胞已老化或者已經(jīng)開始分化(在全部細胞中出現(xiàn)少數(shù)老化細胞是正常的);
★ 細胞立體感逐漸消失,,細胞間的間隔不清,,部分細胞扁平狀,細胞的形狀趨向多樣,;
★ 貼壁性減退,,出現(xiàn)一些漂浮的細胞;部分分泌強的細胞分泌物增多,,細胞表面會比較臟,;
★ 細胞增殖速度明顯下降,,分裂相的細胞明顯減少。
干細胞老化的原因和預(yù)防
1) 接種密度的影響:部分干細胞具有一定的分泌性能,,能夠分泌一些對細胞有支持能力的因子類物質(zhì),;所以必須維持一定的接種密度,,否則會導(dǎo)致腫瘤細胞增殖減慢,,zui后出現(xiàn)老化;
2) 消化過度:消化細胞時會對細胞的表面蛋白有較強的損傷,,所以消化的時間不能過長,,使用合適濃度和pH 值的消化酶,否則會導(dǎo)致細胞老化和分化,;
3) 合適的密度的時候就要傳代:細胞如果過密,,接觸抑制作用會導(dǎo)致細胞的活力減弱并影響增殖導(dǎo)致老化;
4) 使用合適的血清和培養(yǎng)基:不同的干細胞對培養(yǎng)基特別是血清的要求不同,,所以使用不同的培養(yǎng)用的血清進行篩選,,尋找該干細胞培養(yǎng)的血清是預(yù)防細胞老化,維持腫瘤細胞正常生長的重要保證,。
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