腫瘤細(xì)胞單克隆抗體的制備

時(shí)間：2017-5-19閱讀：239

1）腫瘤細(xì)胞的制備制備單克隆抗體的動(dòng)物多采用純系Balb/c小鼠,。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì)。免疫方法同一般血清的制備,，也可采用脾內(nèi)直接免疫法。

2）骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與篩選在融合前，骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)經(jīng)過含8-AG的培養(yǎng)基篩選,，防止細(xì)胞發(fā)生突變恢復(fù)HGPRT的活性（恢復(fù)HGPRT的活性的細(xì)胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活）。骨髓瘤細(xì)胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，融合前24h換液一次,，使骨髓瘤細(xì)胞處于對數(shù)生長期。

3）細(xì)胞融合的關(guān)鍵:

1技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗,。例如,，供者淋巴細(xì)胞沒有查到免疫應(yīng)答。這必然要失敗的,。

2腫瘤細(xì)胞融合試驗(yàn)zui大的失敗原因是污染,，融合成功的關(guān)鍵是提供一個(gè)干凈的環(huán)境，以及適宜的無菌操作技術(shù),。

4）陽性克隆的篩選應(yīng)盡早進(jìn)行,。通常在融合后10天作*次檢測，過早容易出現(xiàn)假陽性,。檢測方法應(yīng)靈敏,、準(zhǔn)確、而且簡便快速,。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì),，以及所需單克隆抗體的功能進(jìn)行選擇。常用的方法有RIA法,、ELISA法和免疫熒光法等,。其中ELISA法zui簡便,，RIA法zui準(zhǔn)確。陽性克隆的篩選應(yīng)進(jìn)行多次,，均陽性時(shí)才確定為陽性克隆進(jìn)行擴(kuò)增,。

5）克隆化克隆化的目的是為了獲得單一細(xì)胞系的群體?？寺』瘧?yīng)盡早進(jìn)行并反復(fù)篩選,。這是因?yàn)槌跗诘碾s交腫瘤細(xì)胞是不穩(wěn)定的，有丟失染色體的傾向,。反復(fù)克隆化后可獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞株,。

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