原代細(xì)胞*,，蓋玻片需要過酸，并且自來水,、蒸餾水沖洗干凈,。兩張或者以上的玻片很容易因?yàn)楹缥饔谜车揭黄穑苋菀讻_不干凈,，很容易把兩張*重疊在一起的玻片當(dāng)成一張,，一定要看清楚，晾干片子是在消毒飯盒中進(jìn)行,，飯盒底面放上紗布,，將玻片斜靠在飯盒側(cè)壁，玻片正面不要接觸紗布,，否則會粘上毛毛的,。然后高壓蒸汽滅菌，烤箱中烤干,。
第二,，爬片前用多聚賴氨酸或者層粘蛋白或者膠原溶液處理玻片，未處理過的細(xì)胞不容易貼壁,，細(xì)胞系還好,，原代細(xì)胞很少能貼得牢。這一步至關(guān)重要,，否則在后面用PBS洗片時(shí)很容易將細(xì)胞洗掉,。用這些促進(jìn)細(xì)胞貼壁的溶液處理玻片后，放到培養(yǎng)皿之前需要用培養(yǎng)基沖洗一到三遍,！層粘蛋白和膠原還好,，多聚賴氨酸有幾次我沒沖結(jié)果細(xì)胞全部不貼壁。
第三,，傳代消化下來的細(xì)胞一定不要過多稀釋,，將濃一點(diǎn)的細(xì)胞懸液吹打混勻后滴在玻片上，幾個(gè)小時(shí)后再追加培養(yǎng)基,。
第四,，玻片在培養(yǎng)皿中容易漂起，如果事先在皿中鋪上液體很可能會不容易揭下來,，或者揭下來時(shí)出印子在鏡下很難看,。漂起的玻片很容易兩面都培養(yǎng)出細(xì)胞的,，這時(shí)背面的細(xì)胞必須去除,，挺難操作的，用PBS沖洗可能會傷到正面的細(xì)胞,，用小鑷子夾玻片很容易夾碎,，也很容易脫落,，小心點(diǎn)好。
第五,，將玻片拿出后一定要記好哪邊是正面,，做玻片時(shí)將玻片切成長方形的。目前市場售的多為18mm x 18mm的蓋玻片,，或者24mmx24mm的蓋玻片,，正方形，很難分辨反正面,，在某個(gè)角上打個(gè)缺口,，對正方形是不中用的?？梢杂眯∩拜喦幸幌赂某砷L方形,，至于在某個(gè)角上用砂輪做個(gè)標(biāo)記，理論上很簡單,，實(shí)際操作有難度,。
第六，上面步驟都沒問題后,，玻片就需要進(jìn)一步處理了,，這里有幾個(gè)細(xì)節(jié)，分述如下：
1.PBS對玻片是沖洗還是浸泡,，我個(gè)人認(rèn)為浸泡好,，我吃過沖洗的虧，每一步后都要沖洗2-3次,，有時(shí)還沒等試驗(yàn)做完,，大部分細(xì)胞已經(jīng)被沖掉了，呵呵,！我當(dāng)時(shí)欲哭無淚?。?br />2.4%的多聚甲醛或者別的固定液的溫度是多少,，有人認(rèn)為4°C的好,，有人認(rèn)為37°C的好，我個(gè)人感覺,，嬌貴的原代細(xì)胞先在常溫下固定較好,，然后放到4°C冰箱中。我發(fā)現(xiàn)直接用4°C的溶液會造成細(xì)胞冷休克,，從片上脫落,。
3.用中性樹膠粘蓋玻片與載玻片時(shí)，盡量少滴樹膠，一點(diǎn)點(diǎn)就夠了,，而且至少半個(gè)小時(shí)以上才能粘牢,，防止在水中脫落。否則蓋玻片就會移動,，背面會出現(xiàn)樹膠的印子,，鏡下很難看，而且擦不掉的,。