原代細胞實驗中正常機體的T淋巴細胞在體外培養(yǎng)過程中受到特異性抗原或有絲分裂原刺激,??赊D化為淋巴母細胞。細胞免疫缺陷時,患惡性腫瘤或某些其他疾病時,。轉化率顯然降低,。目前zui常用植物血凝素(PHA)作為分裂原來檢測受試者的淋巴細胞轉化率,從而判定其細胞免疫功能,,稱為PHA刺激淋巴細胞實驗的轉化實驗,。
實驗材料
肝素
試劑、試劑盒
199培養(yǎng)液小牛血清鏈霉素青霉素PHA
儀器,、耗材
注射器針頭試管吸管離心機
實驗步驟
1. 采肝素抗凝血1~2毫升(1毫升血中加肝素20單位)充分混勻,。37℃靜置1~2小時。紅細胞沉淀后,,吸取血漿層并捎帶些紅細胞,。移入另一無菌試管中。計算白細胞數然后2000 rpm 離心10分鐘,。棄上清液,。用199培養(yǎng)液將沉淀的白細胞配成1×107/毫升細胞懸液。
2. 取細胞懸液0.6毫升(6×106細胞)加入含有2.4毫升199培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中,。
3. 按每毫升營養(yǎng)液加30 ug PHA加入PHA,。
4. 37℃孵育68~72小時。培養(yǎng)過程中,,每天翻動培養(yǎng)瓶1~2次,。
5. 培養(yǎng)后,。振蕩培養(yǎng)瓶,。將細胞重新懸起,然后移入試管中,。
6. 1000 rpm 離心5分鐘,。
7. 盡量棄去上清液,將沉淀物混勻,,取一滴放在載玻片上,,推成血膜(頭、體,、尾分明)干燥,,用瑞特氏染液染色)鏡檢。
8. 原代細胞實驗中計算淋巴細胞的轉化率:油鏡下觀察每張玻片的頭,、體,、尾三段。每段各一縱列(目的是減少推片中細胞分布不均的誤差),。
9. 每張玻片記數200~400個細胞,,計算轉化率其中頭部50~100,體部50~100,尾部100~200細胞,。 一般認為轉化率的正常值為60~70%
Acetaminophen 對乙酰氨基酚標準品 103-90-2 400mg
8-Bromotheophylline 8-溴茶堿標準品 10381-75-6 400mg
ALPHA-乳白蛋白標準品 400mg
氟化牙粉:單氟磷酸鈉/磷酸氫鈣標準品 4.6oz
氟化牙粉:單氟磷酸鈉-碳酸鈣標準品 4.6oz
氟化牙粉:氟化鈉/二氧化硅標準品 4.5oz
Methyl Alcohol 甲醇標準品 67-56-1 3x1.5ml
Diethanolamine 二乙醇胺標準品 111-42-2 3ml
三乙醇胺標準品 102-71-6 3ml
帕立骨化醇溶液標準品 3ml
曲沃前列素標準品 3ml
Potassium Bitartrate (AS) 酒石酸氫鉀標準品 868-14-4 3g
原代細胞
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