實驗原理 
染色體是在顯微鏡下可見細(xì)胞系有絲分裂過程中出現(xiàn)的結(jié)構(gòu),。因此,，必須獲得染色體標(biāo)本才能進行檢查分析,，通常情況下,，都是利用外周血淋巴細(xì)胞進行核型分析,。正常情況下，人體外周血淋巴細(xì)胞不再分裂,，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成淋巴母細(xì)胞,，使其恢復(fù)增殖能力。因此,，可采取少量外周靜脈血,，做短期培養(yǎng)，培養(yǎng)至72小時細(xì)胞進入增殖旺盛期,，此時加入秋水仙素抑制細(xì)胞分裂,，使細(xì)胞分裂停止在中期以獲得足夠量的分裂期細(xì)胞,，經(jīng)低滲、固定,、制片,、染色后鏡下觀察進行核型分析。上述制備的染色體標(biāo)本經(jīng)胰蛋白酶消化,、Giemsa染色后,，可在染色體縱軸上顯示出著色深、淺相間的橫紋——帶,，表明每條染色體的特征,。 

實驗用品 
1．采血器材、酒精燈,、培養(yǎng)瓶,、超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱,、恒溫水浴箱,、離心機、刻度離心管,、乳頭吸管,、試管架、量筒,、試劑瓶,、載玻片、吹風(fēng)機,、托盤天平,、顯微鏡、鏡油,、二甲苯,、擦鏡紙、鑷子,、燒杯,、記號筆、玻片架,、火柴,、10ml注射器。 
2．RPMI 1640液體培養(yǎng)基,、小牛血清、肝素（500 U/ml）,、植物血凝素（PHA）,、秋水仙素（10mg/ml）,、KCl低滲液（0.075mol/L）、甲醇,、冰乙酸,、Giemsa原液、磷酸緩沖液（PH6.8）,。 
3．2.5％胰酶溶液（hanks液配制）,、0.4％酚紅、Giemsa染色液,、1N鹽酸,、1N氫氧化鈉。 

實驗步驟 
一．外周血淋巴細(xì)胞系染色體標(biāo)本制備與分析 
1. 采血及接種培養(yǎng) 
1.1 在酒精燈火焰上,，用滅菌注射器（一次性注射器）抽取肝素0.2ml,，使肝素濕潤至管壁。 
1.2 常規(guī)消毒后,，采集外周靜脈血5ml,，轉(zhuǎn)動注射器使血液與肝素混勻。 
1.3 在超凈工作臺中,，預(yù)先將RPMI 1640液體培養(yǎng)基（5ml,，含植物血凝素60mg/ml、10%小牛血清）加入消毒好的小培養(yǎng)瓶中,，再滴加25滴全血（6號針頭）,，水平搖動混勻。 
1.4 置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時,。培養(yǎng)過程中每天水平搖動培養(yǎng)物1～2次,，使血液均勻懸浮，再繼續(xù)培養(yǎng),。 
1.5 終止培養(yǎng)前2～4小時,，加入秋水仙素，使終濃度達到0.2μg/ml,。輕輕搖動培養(yǎng)瓶,，使秋水仙素混勻。繼續(xù)培養(yǎng)至72小時,。 

2．制片 
2.1 收集細(xì)胞時,，去掉瓶塞，用乳頭吸管吸取培養(yǎng)液,，充分混勻培養(yǎng)物,，再將全部培養(yǎng)物吸入刻度離心管中。 
2.2 1000 rpm離心8分鐘（注意先配平）。 
2.3 棄上清液,，加入37℃預(yù)溫的 0.075 mol/L KCl溶液8 ml,，用吸管輕輕吹打細(xì)胞團混勻后，置37℃恒溫水浴箱低滲處理25分鐘,。 
2.4 加入 1ml新配制的固定劑（甲醇：冰乙酸=3：1）,，用吸管小心吹打、混勻,，1000rpm離心8分鐘,。 
2.5 棄上清液，加入8ml固定劑,，吹打細(xì)胞團制成細(xì)胞懸液后,，室溫下固定20分鐘。 
2.6 1000 rpm離心 8分鐘,。 
2.7 棄上清液,，重復(fù)固定一次。 
2.8 棄上清液,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量的多少適當(dāng)加入數(shù)滴新配制的固定劑,，吹打細(xì)胞制成懸液。 
2.9 吸取少量細(xì)胞懸液,，滴2～3滴于冰水浸泡過的載玻片上,，吹散，氣干,。 
2.10 將標(biāo)本置Giemsa染液中,，染色8分鐘，水洗去浮色,，氣干,。 
2.11 顯微鏡下觀察染色體標(biāo)本分裂相的多少及分散細(xì)胞系情況。