實(shí)驗(yàn)原理 
染色體是在顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞系有絲分裂過(guò)程中出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。因此,，必須獲得染色體標(biāo)本才能進(jìn)行檢查分析,，通常情況下,，都是利用外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行核型分析。正常情況下,，人體外周血淋巴細(xì)胞不再分裂,，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成淋巴母細(xì)胞，使其恢復(fù)增殖能力,。因此,，可采取少量外周靜脈血，做短期培養(yǎng),，培養(yǎng)至72小時(shí)細(xì)胞進(jìn)入增殖旺盛期,，此時(shí)加入秋水仙素抑制細(xì)胞分裂，使細(xì)胞分裂停止在中期以獲得足夠量的分裂期細(xì)胞,，經(jīng)低滲,、固定、制片,、染色后鏡下觀察進(jìn)行核型分析,。上述制備的染色體標(biāo)本經(jīng)胰蛋白酶消化、Giemsa染色后,，可在染色體縱軸上顯示出著色深,、淺相間的橫紋——帶，表明每條染色體的特征,。 

實(shí)驗(yàn)用品 
1．采血器材,、酒精燈、培養(yǎng)瓶,、超凈工作臺(tái),、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱,、離心機(jī),、刻度離心管、乳頭吸管,、試管架,、量筒、試劑瓶,、載玻片,、吹風(fēng)機(jī)、托盤天平,、顯微鏡,、鏡油、二甲苯、擦鏡紙,、鑷子,、燒杯、記號(hào)筆,、玻片架,、火柴、10ml注射器,。 
2．RPMI 1640液體培養(yǎng)基,、小牛血清、肝素（500 U/ml）,、植物血凝素（PHA）、秋水仙素（10mg/ml）,、KCl低滲液（0.075mol/L）,、甲醇、冰乙酸,、Giemsa原液,、磷酸緩沖液（PH6.8）。 
3．2.5％胰酶溶液（hanks液配制）,、0.4％酚紅,、Giemsa染色液、1N鹽酸,、1N氫氧化鈉,。 

實(shí)驗(yàn)步驟 
一．外周血淋巴細(xì)胞系染色體標(biāo)本制備與分析 
1. 采血及接種培養(yǎng) 
1.1 在酒精燈火焰上，用滅菌注射器（一次性注射器）抽取肝素0.2ml,，使肝素濕潤(rùn)至管壁,。 
1.2 常規(guī)消毒后，采集外周靜脈血5ml,，轉(zhuǎn)動(dòng)注射器使血液與肝素混勻,。 
1.3 在超凈工作臺(tái)中，預(yù)先將RPMI 1640液體培養(yǎng)基（5ml,，含植物血凝素60mg/ml,、10%小牛血清）加入消毒好的小培養(yǎng)瓶中，再滴加25滴全血（6號(hào)針頭）,，水平搖動(dòng)混勻,。 
1.4 置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)過(guò)程中每天水平搖動(dòng)培養(yǎng)物1～2次,，使血液均勻懸浮,，再繼續(xù)培養(yǎng)。 
1.5 終止培養(yǎng)前2～4小時(shí)，加入秋水仙素,，使終濃度達(dá)到0.2μg/ml,。輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使秋水仙素混勻,。繼續(xù)培養(yǎng)至72小時(shí),。 

2．制片 
2.1 收集細(xì)胞時(shí)，去掉瓶塞,，用乳頭吸管吸取培養(yǎng)液,，充分混勻培養(yǎng)物，再將全部培養(yǎng)物吸入刻度離心管中,。 
2.2 1000 rpm離心8分鐘（注意先配平）,。 
2.3 棄上清液，加入37℃預(yù)溫的 0.075 mol/L KCl溶液8 ml,，用吸管輕輕吹打細(xì)胞團(tuán)混勻后,，置37℃恒溫水浴箱低滲處理25分鐘。 
2.4 加入 1ml新配制的固定劑（甲醇：冰乙酸=3：1）,，用吸管小心吹打,、混勻，1000rpm離心8分鐘,。 
2.5 棄上清液,，加入8ml固定劑，吹打細(xì)胞團(tuán)制成細(xì)胞懸液后,，室溫下固定20分鐘,。 
2.6 1000 rpm離心 8分鐘。 
2.7 棄上清液,，重復(fù)固定一次,。 
2.8 棄上清液，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量的多少適當(dāng)加入數(shù)滴新配制的固定劑,，吹打細(xì)胞制成懸液,。 
2.9 吸取少量細(xì)胞懸液，滴2～3滴于冰水浸泡過(guò)的載玻片上,，吹散,，氣干。 
2.10 將標(biāo)本置Giemsa染液中,，染色8分鐘,，水洗去浮色，氣干,。 
2.11 顯微鏡下觀察染色體標(biāo)本分裂相的多少及分散細(xì)胞系情況,。