原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題,，客戶遇到的問題從細(xì)胞生長角度來說,，針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢,、生長不好,，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法,。
一,、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
可能原因： 
●胰蛋白酶消化過度 
●支原體污染 
●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）               
●細(xì)胞老化 
●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 
解決方法： 
●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度 
●分離培養(yǎng)物，檢測支原體,。清潔支架或培養(yǎng)箱,。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物,。 
●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2 
●啟用新的保種細(xì)胞 
●調(diào)節(jié)*接種細(xì)胞濃度
二,、懸浮細(xì)胞成簇
可能原因： 
●培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子,； 
●支原體污染,； 
●蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解； 
●DNA污染 
解決方法： 
●用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液,； 
●分離培養(yǎng)物，檢測支原體,； 
●用DNaseI處理細(xì)胞
三,、培養(yǎng)原代細(xì)胞生長緩慢
可能原因：
●由于更換不同培養(yǎng)液或血清； 
●培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞,； 
●培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染,； 
●試劑保存不當(dāng),； 
●接種細(xì)胞起始濃度太低； 
●細(xì)胞已老化,； 
●支原體污染 
解決方法： 
●比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液,； 
●換入新鮮配置培養(yǎng)液,，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長因子；
●用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),，如發(fā)現(xiàn)污染,，丟棄培養(yǎng)物；
●血清需保存在-10到-20℃,。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存,。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完,；
●增加接種細(xì)胞起始濃度,； 
●換用新的保種細(xì)胞； 
●分離培養(yǎng)物,，檢測支原體,。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,，丟棄培養(yǎng)物,。
四、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好
可能原因：
●細(xì)胞本身的狀態(tài)
細(xì)胞傳代次數(shù)多,，細(xì)胞老化,；
細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢,；
細(xì)胞傳代時間過晚：細(xì)胞中毒,，影響傳代后的細(xì)胞生長；
胰酶消化時間過長或過短：時間過長,，細(xì)胞死亡,；時間過短，細(xì)胞未*分離而成團(tuán),，細(xì)胞死亡,；
細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。
●污染
支原體污染
霉菌污染
●培養(yǎng)基或血清
更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證
選擇的培養(yǎng)基是否合適
培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤
●原代細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境
CO2供應(yīng)是否正常
培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確