原代細(xì)胞保存的主要方法之一細(xì)胞凍存

時間：2017/5/25閱讀：5235

利用凍存技術(shù)將原代細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗,。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,，起到了細(xì)胞保種的作用,。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買,、寄贈,、交換和運送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5％．15％的甘油或二甲基亞砜(DMSO),，可使溶液冰點降低,，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出,，減少了冰晶形成,，從而避免細(xì)胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活,。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1 到 -2℃／min,，當(dāng)溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃),。
原代細(xì)胞凍存的方法：
1．細(xì)胞：選對數(shù)生長期細(xì)胞,，收集細(xì)胞24小時前換液一次。
2．計數(shù)：按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,，計數(shù),，令細(xì)胞密度達(dá)5×106/ml，離心去上清,，吸入離心管中,。
3．凍存液：先用培養(yǎng)液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中,，然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。
4．分裝：分裝入無菌安剖中,，每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液,。
5．封口：用塑料安剖時擰緊瓶口即可；如用火焰封閉安剖口后，仔細(xì)檢查,，定要封嚴(yán),，必要時可浸入藍(lán)色液中觀察，為安全起見,，把安剖縫入紗布小袋中,，以防液氮浸入后，融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人,；紗袋一端系以線繩,，末端扎有小牌，注明：原代細(xì)胞名稱,，凍存日期,，以便日后查找。

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