原代細胞保存的主要方法之一細胞凍存

時間：2017/5/25閱讀：5298

利用凍存技術(shù)將原代細胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗,。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,，起到了細胞保種的作用,。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買,、寄贈、交換和運送某些細胞,。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5％．15％的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低,，加之在緩慢凍結(jié)條件下,，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成,，從而避免細胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活,。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃／min,，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃),。
原代細胞凍存的方法：
1．細胞：選對數(shù)生長期細胞,，收集細胞24小時前換液一次,。
2．計數(shù)：按常規(guī)方法把細胞制成細胞懸液，計數(shù),，令細胞密度達5×106/ml,，離心去上清，吸入離心管中,。
3．凍存液：先用培養(yǎng)液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO凍存液,，按上法一滴滴加入離心管中,，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。
4．分裝：分裝入無菌安剖中,，每安剖加1.5毫升細胞懸液,。
5．封口：用塑料安剖時擰緊瓶口即可；如用火焰封閉安剖口后,，仔細檢查,，定要封嚴,，必要時可浸入藍色液中觀察，為安全起見,，把安剖縫入紗布小袋中,，以防液氮浸入后，融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人,；紗袋一端系以線繩,，末端扎有小牌,，注明：原代細胞名稱,，凍存日期，以便日后查找,。

原代細胞保存的主要方法之一細胞凍存

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