（一） 細(xì)胞系選材 常用胚胎動(dòng)物或新生鼠神經(jīng)組織。雞胚常用胚齡6-8d,，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎,。不過(guò)也有認(rèn)為與組織相關(guān)。如大白鼠胚胎以19d為宜,，小鼠以18d為宜,，大鼠紋狀體以10d為宜,；若紋狀體與黑質(zhì)聯(lián)合培養(yǎng)的大鼠胚，則黑質(zhì)以13d,，紋狀體18-21d為宜,；小腦以20-21d小鼠胚胎，所獲蒲氏細(xì)胞成活率高,，顆粒細(xì)胞正在分化,；脊髓與DRG聯(lián)合培養(yǎng)，常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎,，取材易，神經(jīng)成活率高,。
（二） 取材,。腦則取出相應(yīng)組織，在解剖液中先剪碎,，以使胰酶消化。脊髓則固定于瓊脂板上,，用小刀將其要成背腹兩側(cè),，分別培養(yǎng)。
（三） 細(xì)胞分離與接種,。神經(jīng)組織用0.125-0.25%胰蛋白酶在37℃孵育30min,，移入接種液，停止消化,，并洗去胰蛋白酶液,，用細(xì)口吸管吹打細(xì)胞懸液，使其充分分散,，如此多次，待沉淀后吸出上層細(xì)胞懸液,，計(jì)數(shù),，預(yù)置細(xì)胞密度，接種于培養(yǎng)皿（1×106）,，做電生理應(yīng)為5×105或更低。
（四） 抑制膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng),。培養(yǎng)3-5d后,，也有人認(rèn)為培養(yǎng)7d后，用阿糖胞苷,，或5-FU抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng),。
（五） 觀(guān)察,。接種6-12h，開(kāi)始貼壁,，并有集合現(xiàn)象,，細(xì)胞生長(zhǎng)突起明顯,，5-7d膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯，7-10d膠質(zhì)細(xì)胞成片于神經(jīng)細(xì)胞系下面,，形成地毯,，2周時(shí)神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)zui豐滿(mǎn)，四周暈光明顯,，一個(gè)月后,，有些神經(jīng)細(xì)胞開(kāi)始退化,，變形,，甚至出現(xiàn)空泡,，一般培養(yǎng)2-4周zui宜,。
但神經(jīng)細(xì)胞只能增大，而不能增殖,，只能原代,，不能傳代,，不會(huì)有細(xì)胞周期，而且隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),，細(xì)胞數(shù)量在下降,，但膠質(zhì)細(xì)胞可以，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞也可以,。在培養(yǎng)過(guò)程中，早期9-12d時(shí),，有較多的神經(jīng)細(xì)胞死亡,，這是*次死亡階段,，應(yīng)注意保持條件的恒定。在此之后存活下去的細(xì)胞一般突起長(zhǎng)而多,，且相互形成突觸,。
（六） 常用培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)有：FCM的蛋白總量分析,；膜片鉗與離子通道的分析；免疫組化分析,；
但免疫組化分析應(yīng)注意,，由于抗體直接作用于活細(xì)胞,，不易穿透活細(xì)胞，故對(duì)核內(nèi)抗原定位時(shí),，首先考慮膜對(duì)抗體的通透性問(wèn)題,。常用化學(xué)試劑以增加其通透性或采用冰凍方法解決。
在免疫組化中,，或其它組織學(xué)染色中，常用不同的染色方法以區(qū)分不同細(xì)胞,，如半乳糖腦苷脂對(duì)小樹(shù)突膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記明顯,；GFAP對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞具有特異性染色等,。這對(duì)研究神經(jīng)系統(tǒng)中膠質(zhì)細(xì)胞功能具有極大的應(yīng)用價(jià)值。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞以往多被忽視,，其在腦血管疾?。ㄈ缛毖該p傷）,、退行性疾病（如AD,、PD）,、損傷后膠質(zhì)細(xì)胞的填充等具有不可忽視的作用,。它也是神經(jīng)細(xì)胞系功能和營(yíng)養(yǎng)支持的物質(zhì)基礎(chǔ)。