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當前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>蛋白>>活性蛋白/AP>> 羧酸酯酶1(CES1)活性蛋白人
參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
所 在 地上海市
更新時間:2023-03-22 11:07:02瀏覽次數(shù):368次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號 | GOY-01D3154 | 應用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Active Carboxylesterase 1 (CES1) |
物種 | Homo sapiens (Human,,人) |
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號 |
羧酸酯酶1(CES1)活性蛋白人 | Homo sapiens (Human,,人) | GOY-01D3154 |
英文名稱:Active Carboxylesterase 1 (CES1)
ACAT; CEH; CES2; HMSE1; PCE1; SES1; TGH; Retinyl ester hydrolase; Serine esterase 1; Triacylglycerol hydrolase; Egasyn; Cocaine carboxylesterase; Liver Carboxylesterase 1
型號:GOY-01D3154
酶與激酶
代謝通路
神經(jīng)科學
物種:Homo sapiens (Human,人)
緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性狀:凍干粉
純度:> 90%
等電點:6.8
應用:Cellculture;ActivityAssays.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,,通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清),。
3.通過親和,,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
交付內(nèi)容:純化好的目標蛋白及純化報告,??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達90%以上,。
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操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預冷的離心管,,離心10000轉(zhuǎn)/分,,4℃離心5 min;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預冷的離心管中,,即為全蛋白提取物,,蛋白定量(Bradford法、BCA法),;
5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,吸去培養(yǎng)基后,,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中,, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次,;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。
4. 細胞洗滌后,,轉(zhuǎn)至新的預冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,,加入量如下表所示:
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,,4℃離心15min,,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法,、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。
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