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供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號 | GOY-01D3111 | 應用領域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Active Caspase 1 (CASP1) |
物種 | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) |
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產品屬性:
產品名稱 | 物種 | 貨號 |
胱天蛋白酶1(CASP1)活性蛋白大鼠 | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) | GOY-01D3111 |
英文名稱:Active Caspase 1 (CASP1)
ICE; IL1BC; IL1-BC; P45; Interleukin 1 Beta Converting Enzyme; Apoptosis-Related Cysteine Peptidase; Interleukin-1 beta convertase
型號:GOY-01D3111
信號轉導
酶與激酶
細胞凋亡
感染免疫
物種:Rattus norvegicus (Rat,,大鼠)
緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性狀:凍干粉
純度:> 95%
等電點:7.7
應用:Cellculture;ActivityAssays.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,,然后將重組質粒轉染到細胞中,通過瞬時表達產生目標蛋白,。
2.收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清),。
3.通過親和,離子交換,,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白,。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性,。
交付內容:純化好的目標蛋白及純化報告,。可按客戶要求提供含純化標簽(Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,,純度最高可達90%以上,。
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻,。冰上保存數分鐘待用,。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作,;
3. 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管,,離心10000轉/分,4℃離心5 min,;
4. 取上清轉移至新的預冷的離心管中,,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法,、BCA法),;
5. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,,吸去培養(yǎng)基后,,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數次以盡量去除培養(yǎng)液,;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉/分離心10 min,,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,,1000轉/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,,混勻。冰上保存數分鐘待用,。
4. 細胞洗滌后,,轉至新的預冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,,加入量如下表所示:
細胞數量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,,4℃離心15min,,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復凍融,。
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