產(chǎn)品特點(diǎn)：

本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量PCR產(chǎn)品。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,，擴(kuò)增效率＝倍,，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

運(yùn)輸：低溫

保存：負(fù)20度

有效期：一年

貨期：2-3周

注意事項(xiàng)：

1.基礎(chǔ)程序,；

2.擴(kuò)增溫度和延伸溫度,；

3.反應(yīng)時(shí)間；

4.循環(huán)次數(shù),；

5.PCR反應(yīng)液的配制,；

6.PCR技術(shù)的基本原理；

7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué),；

8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；

9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

浮萍染料法PCR鑒定試劑盒使用方法：

一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。

1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,，分別為7,，6，5,，4,，3，2,。

2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液,，用帶芯槍頭，下同）,。

3. 在7號(hào)管中加入5μL陽(yáng)性對(duì)照（濃度為1×10E8拷貝/μL,，試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品,。放冰上待用。

4. 換槍頭,，在6號(hào)管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘,，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品,。放冰上待用。

5. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品,。放冰上待用,。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用,。

二,、樣品DNA的制備

7. 用自選方法純化樣品的DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容,。

8. 如果有N個(gè)樣品,，則需要進(jìn)行N+2個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管,、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管,。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20μL體系,，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),。如果做定性分析,，并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管,，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照,。

注意事項(xiàng)：

①加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子,。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時(shí),，避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。