詳細(xì)介紹
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產(chǎn)品名稱:線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH紫外分光光度法測(cè)試盒
規(guī)格 : 25管/24樣
測(cè)試方法: 紫外分光光度法
貨號(hào):GOY-01S6333
分類:輔酶Ⅰ系列
商品介紹:
復(fù)合體Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶,廣泛存在于動(dòng)物,、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,,是線粒體內(nèi)膜中最大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對(duì)電子從NADH傳遞給CoQ,,同時(shí)可使O2還原生成O2.-,,是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位,。測(cè)定該酶活性,,不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈(ETC)狀態(tài),而且可以反映活性氧(ROS)生成狀態(tài),。
測(cè)定原理
復(fù)合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫生成NAD+,,在340nm下測(cè)定NADH的氧化速率計(jì)算出該酶活性的大小,。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿,、研缽、冰和蒸餾水,。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存,。
提取液二:液體50mL×1瓶,,4℃保存,。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存,;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存,;
試劑二:液體18μL×1瓶,,4℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存,;
試劑三:粉劑×1瓶,,-20℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存,;
試劑四:液體50mL×1瓶,, 4℃保存,;
測(cè)定步驟
1,、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零,。
2、 將試劑一,、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘,。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,,200W,,破碎3s,間歇7s,,總時(shí)間1min),,然后4℃,,8000g離心10min,,取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一),,冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,,棄沉淀,,取上清在4℃,8000g離心10min,,取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,,破碎3s,間歇7s,,總時(shí)間1min),,然后4℃,8000g離心10min,,取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性,。
建議測(cè)定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,,則按照步驟②提取粗酶液。
鋅指蛋白851抗體 形成素2抗體(成蛋白)
嗜乳脂蛋白2亞型A1抗體 星形細(xì)胞瘤高表達(dá)蛋白抗體(環(huán)指蛋白100)
0酸化c-fos抗體 星形膠質(zhì)細(xì)胞抗體
0酸化原癌基因c-Jun抗體 星形膠質(zhì)細(xì)胞PEA15抗體
0酸化原癌基因c-kit抗體 星形肌動(dòng)蛋白抗體
大鼠膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠角蛋白1(KRT1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠角蛋白18(KRT18)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)elisa檢測(cè)試劑盒
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH紫外分光光度法測(cè)試盒柱式植物葉綠體 DNAout15 次 化乙錠溶液 ,10 mg/mL1.5mL
線狀 DNA 清除劑30 次 化乙錠清除劑100 次
細(xì)菌 DNAout50 次 化乙錠干粉 (EB)1g
細(xì)菌 DNAout250 次 星形細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL
柱式細(xì)菌 DNAout50 次 星形膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L,;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,,1cm,;V樣:加入樣本體積,0.1 mL,;V樣總:加入提取液體積,,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,,g,。