商品介紹：
ME廣泛存在于微生物,、培養(yǎng)細胞,、動物和植物胞漿中,，尤其在植物組織中活性較高,。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),，產(chǎn)生丙酮酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng),，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶,。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測定較多,，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點,。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40),。

測定原理：

NAD-ME催化NAD+還原成NADH,，在340nm下測定NADH增加速率。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標(biāo)儀,、水浴鍋,、臺式離心機、可調(diào)式移液器,、1mL石英比色皿和蒸餾水,。

產(chǎn)品名稱：NAD蘋果酸酶（NADME）紫外分光光度法測試盒
規(guī)格 : 50管/48樣
測試方法: 紫外分光光度法
貨號：GOY-01S6361
分類：輔酶Ⅱ系列

試劑的組成和配制
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存,。
提取液二：液體50mL×1瓶,，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶,，-20℃保存,；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存,；
試劑二：液體18μL×1瓶,，4℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,，用不完的試劑4℃保存,；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存,；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶,， 4℃保存,；
測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至340nm,，蒸餾水調(diào)零,。
2、 將試劑一,、二,、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3,、 加樣表：

樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎3s,，間歇7s,，總時間1min），然后4℃,，8000g離心10min,，取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本,，加入1mL提取液一）,，冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min,，棄沉淀,，取上清在4℃,，8000g離心10min,，取上清用于測定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二,，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎3s,，間歇7s,，總時間1min），然后4℃,，8000g離心10min,，取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,，按照步驟①提取粗酶液,，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP，則按照步驟②提取粗酶液,。
FBP活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位,。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位,。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L,；ε：NADPH摩爾消光系數(shù),，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V樣：加入樣本體積，0.1 mL,；V樣總：加入提取液體積,，1mL；T：反應(yīng)時間,，5 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g。
【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用,，不得用于人體臨床直接檢測,。避免給您帶來不必要的損失，請仔細閱讀購買說明,！
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