劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶,，4℃保存。
試劑一：液體20mL×1瓶,，4℃保存,。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存,。臨用前加1mL蒸餾水溶解,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融,。
試劑三：粉劑×1瓶,，4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解,；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復凍融,。
試劑四：粉劑×1瓶,，4℃避光保存,。臨用前加1mL蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

商品介紹：
TH位于線粒體的內(nèi)膜上,，又稱為線粒體復合體六,，催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化,，調(diào)節(jié)線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡,。把逆向反應稱為TH-2，催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。

測定原理：

NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,，因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應不能導致340nm吸光度發(fā)生變化,。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD+）替代NAD+，TH-2催化APAD+還原生成APADH,，APADH在375nm有特征光吸收,，測定375nm光吸收的增加速率,，來計算TH-2活性,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計,、臺式離心機,、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水,。
測定操作表：

酶活性計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算：
酶活性定義：在pH7.2,，溫度為37℃條件下,，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位（U）。
DAO活性（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 18×A460÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算：
酶活性定義：在pH7.2,，溫度為37℃條件下,，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 18×A460÷W
（3）按細胞數(shù)量計算：
酶活性定義：在pH7.2,，溫度為37℃條件下,，每104個細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/104cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數(shù)量）÷T= 18×A460÷細胞數(shù)量
(4) 按液體體積計算
酶活性定義：在pH7.2,，溫度為37℃條件下,，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性（nmol/min/mL）= ×V反總÷V樣÷T= 18×A460
ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù)：7.5 L/mmol/cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V反總：反應總體積,，0.2mL,；V樣：反應中樣本體積，0.05mL,；V樣總：加入提取液體積,，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；T：反應時間,，30min
b. 用96孔板測定的計算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下,，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位（U）,。
DAO活性（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 36×A460÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下,，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位,。
DAO活性（nmol/min/g 鮮重）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 36×A460÷W
（3）按細胞數(shù)量計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下,，每104個細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位,。
血管加壓素激活鈣啟動受體蛋白1抗體     細胞分裂周期蛋白5抗體

干細胞生長因子受體/細胞表面分化抗原抗體     細胞分裂周期蛋白2亞型1抗體

軸突相關(guān)粘附分子抗體     細胞分裂周期蛋白2抗體

鈣平衡調(diào)節(jié)蛋白1抗體     細胞分裂周期蛋白25抗體

阿爾茨海默病淀粉樣蛋白相關(guān)膠原蛋白抗體     細胞分裂周期蛋白25C抗體
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