詳細介紹
商品介紹:
SSS(EC 2.4.1.21)通常以游離態(tài)存在于質體基質中,催化淀粉鏈延長,,主要負責支鏈淀粉的合成,。
測定原理
SSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應,,將葡萄糖分子轉移到淀粉引物上,同時生成ADP,,在反應體系中添加的丙酮酸激酶,、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,NADPH生成量與前一步反應中ADP生成量呈正比,,340nm下測定NADPH增加量即可計算SSS活性,。
需自備的的儀器和用品
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋,、臺式離心機,、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品名稱:可溶性淀粉合成酶(SSS)微量法測試盒
規(guī)格 : 100管/96樣
測試方法: 微量法
貨號:GOY-01S6678
分類:淀粉系列
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,,4℃保存,。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存,。
試劑一:粉劑×1瓶,,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存,;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶,, 4℃保存,;
測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上,,調節(jié)波長至340nm,,蒸餾水調零。
2,、 將試劑一,、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘,。
3,、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提取:建議稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一,,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,,破碎3s,,間歇7s,總時間1min),,然后4℃,,8000g離心10min,取上清測定,。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,,200g離心5min,,棄沉淀,取上清在4℃,,8000g離心10min,,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,,200W,破碎3s,,間歇7s,,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,,取上清測定葉綠體中FBP酶活性,。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,,則按照步驟②提取粗酶液。
FBP活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位,。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位,。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應體系總體積,,1×10-3 L,;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm,;d:比色皿光徑,,1cm;V樣:加入樣本體積,,0.1 mL,;V樣總:加入提取液體積,1mL,;T:反應時間,,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,,mg/mL,;W:樣本質量,g,。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,,請仔細閱讀購買說明,!
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