詳細(xì)介紹
商品介紹:
SBE(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶,,測定SBE活性在淀粉生物合成,、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。
測定原理
淀粉和碘結(jié)合后在660nm有特征光吸收,,SBE可切斷支鏈淀粉側(cè)支,,從而降低了淀粉-碘復(fù)合物在660nm吸收值,一定時間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映SBE活性,。
需自備的的儀器和用品
可見分光光度計,、水浴鍋、臺式離心機,、可調(diào)式移液器,、1 mL玻璃比色皿、研缽,、冰,、蒸餾水
產(chǎn)品名稱:淀粉分支酶(SBE)可見分光光度法測試盒
規(guī)格 : 50管/24樣
測試方法: 可見分光光度法
貨號:GOY-01S6683
分類:淀粉系列
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存,。
提取液二:液體50mL×1瓶,,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存,;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,,4℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存,;
試劑三:粉劑×1瓶,,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存,;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存,;
測定步驟
1,、 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,,蒸餾水調(diào)零。
2,、 將試劑一,、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘,。
3,、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提取:建議稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一,,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,,破碎3s,,間歇7s,總時間1min),,然后4℃,,8000g離心10min,取上清測定,。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,,200g離心5min,,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,,200W,,破碎3s,間歇7s,,總時間1min),,然后4℃,8000g離心10min,,取上清測定葉綠體中FBP酶活性,。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,,則按照步驟②提取粗酶液。
FBP活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位,。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位,。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L,;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,,1cm,;V樣:加入樣本體積,0.1 mL,;V樣總:加入提取液體積,,1mL;T:反應(yīng)時間,,5 min,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,;W:樣本質(zhì)量,,g。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,,不得用于人體臨床直接檢測,。避免給您帶來不必要的損失,請仔細(xì)閱讀購買說明,!
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