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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化試劑盒>>糖代謝系列>> 山梨醇可見分光光度法測(cè)試盒
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產(chǎn)品型號(hào)
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
所 在 地上海市
更新時(shí)間:2022-03-15 09:47:58瀏覽次數(shù):374次
聯(lián)系我時(shí),,請(qǐng)告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50管/48樣 |
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貨號(hào) | GOY-01S6727 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅用于科研 |
商品介紹:
山梨醇廣泛存在于動(dòng)物、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,,不僅是糖運(yùn)輸形式之一,而且與生物抗逆性和食物風(fēng)味密切相關(guān),。因此,在糖代謝、抗逆性和食品研究中經(jīng)常需要檢測(cè)山梨醇含量變化,。
測(cè)定原理:
山梨醇在堿性溶液中與銅離子形成藍(lán)色絡(luò)合物,在655nm波長(zhǎng)有特征吸收峰,。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋,、移液器,、1 mL玻璃比色皿/96孔板、研缽,、冰和蒸餾水,。
產(chǎn)品名稱:山梨醇可見分光光度法測(cè)試盒
規(guī)格 : 50管/48樣
測(cè)試方法: 可見分光光度法
貨號(hào):GOY-01S6727
分類:糖代謝系列
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存,。
提取液二:液體50mL×1瓶,,4℃保存,。
試劑一:粉劑×1瓶,,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存,;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,,-20℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存,;
試劑四:液體50mL×1瓶,, 4℃保存;
測(cè)定步驟
1,、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零,。
2,、 將試劑一、二,、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘,。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一,,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,,破碎3s,,間歇7s,總時(shí)間1min),,然后4℃,,8000g離心10min,取上清測(cè)定,。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,,200g離心5min,,棄沉淀,取上清在4℃,,8000g離心10min,,取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,,200W,破碎3s,,間歇7s,,總時(shí)間1min),然后4℃,,8000g離心10min,,取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性,,按照步驟①提取粗酶液,,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液,。
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,,1×10-3 L,;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm,;d:比色皿光徑,,1cm;V樣:加入樣本體積,,0.1 mL,;V樣總:加入提取液體積,,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,,5 min,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,;W:樣本質(zhì)量,,g。
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