詳細介紹
【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,,不得用于人體臨床直接檢測,。避免給您帶來不必要的損失,,請仔細閱讀購買說明,!
產品名稱:肉桂酸4羥化酶(C4H)微量法測試盒
規(guī)格 : 100管/96樣
測試方法: 微量法
貨號:GOY-01S6948
分類:其它系列
商品介紹:
C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶,,多存在于高等植物,、酵母、菌類中,,該酶催化肉桂酸羥化作用產生4-香豆酸鹽,,是苯丙烷途徑中繼L-苯丙氨酸解氨酶之后的第二個關鍵酶。
測定原理:
C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸鹽和NADPH,,在340nm下測定NADPH生成速率,,即可反映C4H活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀,、臺式離心機,、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存,。
提取液二:液體50mL×1瓶,,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,,-20℃保存,;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存,;
試劑二:液體18μL×1瓶,,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存,;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶,, 4℃保存,;
測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上,,調節(jié)波長至340nm,,蒸餾水調零。
2,、 將試劑一,、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘,。
3,、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提取:建議稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一,,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,,破碎3s,,間歇7s,總時間1min),,然后4℃,,8000g離心10min,取上清測定,。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,,棄沉淀,,取上清在4℃,8000g離心10min,,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,,200W,,破碎3s,間歇7s,,總時間1min),然后4℃,,8000g離心10min,,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,,按照步驟①提取粗酶液,,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液,。
型乙酰膽堿受體α6/AChRα6抗體 絲氨酸/蘇氨酸激酶TLK2抗體
型乙酰膽堿受體α9/AChRα9抗體 絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體
型乙酰膽堿受體δ/AChRδ抗體 絲氨酸/蘇氨酸激酶36融合同源蛋白抗體
嗜鉻粒蛋白C抗體 絲氨酸/蘇氨酸蛋白0酸酶4C抗體
卡因和調節(jié)轉錄蛋白抗體 絲氨酸/蘇氨酸蛋白0酸酶1調節(jié)亞基10抗體
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肉桂酸4羥化酶(C4H)微量法測試盒dCTP 溶液,,2.5mM2mL 鈣蛋白酶抑制劑Ⅰ溶液,10mg/mL10mL
dCTP 溶液,,100mM0.5mL 改良 Lowry 法蛋白定量試劑盒1000 次
Deaza dGTP0.4mL 福林酚試劑100mL
雙脫氧 dNTP 套裝40uL×4 糞便 DNAout30 次
dNTP 和引物清除劑100 次 糞便 DNAout100 次
FBP活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位,。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應體系總體積,,1×10-3 L,;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm,;d:比色皿光徑,,1cm;V樣:加入樣本體積,,0.1 mL,;V樣總:加入提取液體積,1mL,;T:反應時間,,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,,mg/mL,;W:樣本質量,g。