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產(chǎn)品名稱：糖原磷酸化酶b（GPb）紫外分光光度法測試盒
規(guī)格 : 50管/24樣
測試方法: 紫外分光光度法
貨號：GOY-01S6978
分類：糖原系列
商品介紹：
糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP,，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,，使糖原分子從非還原端逐個斷開α-1，4-糖苷鍵移去葡萄糖基,，釋放1-磷酸葡萄糖,，直至臨近糖原分子α-1，6-糖苷鍵分支點前4個葡萄糖基處,。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a（GPa）和無活性的糖原磷酸化酶b（GPb）兩種形式,。GPb在一定濃度的腺苷酸（5，-AMP）存在下可被激活,。

測定原理：

GP催化糖原和無機磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,，磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NADP還原生成NADPH,，在340nm下測定NADPH上升速率,，即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸（5,，-AMP）時測定GP（GPa和GPb）活性,，未添加腺苷酸（5，-AMP）時測定GPa活性,，GP活性－GPa活性得到GPb活性,。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機,、可調(diào)式移液器,、1mL石英比色皿、研缽,、冰和蒸餾水,。
試劑的組成和配制
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存,。
提取液二：液體50mL×1瓶,，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶,，-20℃保存,；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存,；
試劑二：液體18μL×1瓶,，4℃保存,；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存,；
試劑三：粉劑×1瓶,，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,，用不完的試劑4℃保存,；
試劑四：液體50mL×1瓶， 4℃保存,；
測定步驟
1,、 分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm,，蒸餾水調(diào)零,。
2、 將試劑一,、二,、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘。
3,、 加樣表：

樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎3s,，間歇7s,，總時間1min），然后4℃,，8000g離心10min,，取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本,，加入1mL提取液一）,，冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min,，棄沉淀,，取上清在4℃，8000g離心10min,，取上清用于測定胞漿FBP酶活性,，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W,，破碎3s,，間歇7s，總時間1min）,，然后4℃,，8000g離心10min，取上清測定葉綠體中FBP酶活性,。
建議測定總FBP酶活性,，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,，則按照步驟②提取粗酶液,。
錨蛋白重復結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體     原鈣粘蛋白β2抗體

共濟失調(diào)7樣蛋白3B抗體     原鈣粘蛋白β12抗體

感染性蛋白蛋白1抗體     原鈣粘蛋白β11抗體

含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族5抗體     原鈣粘蛋白7抗體

植物生長激素ABP1抗體     原鈣粘蛋白1抗體
大鼠睪酮(T)elisa分析檢測試劑盒

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糖原磷酸化酶b（GPb）紫外分光光度法測試盒AGL1 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞10×100μL  Wortmannin(PI3K 抑制劑 )0.5mg

EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞10×100μL  WGA 糖蛋白分離試劑盒10 次

GV3101 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞10×100μL  Vinblastine( 長春新堿 )100μL

LBA4404 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞10×100μL  UTP 溶液，2.5mM2mL

AH109 酵母感受態(tài)細胞10×100μL  UTP 溶液,，100mM0.25mL
FBP活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位,。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積,，1×10-3 L,；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V樣：加入樣本體積,，0.1 mL,；V樣總：加入提取液體積,，1mL,；T：反應(yīng)時間，5 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣本質(zhì)量,，g,。