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小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒操作步驟

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品       牌R&D/美國(guó)

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2017-03-15 13:16:27瀏覽次數(shù):143次

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用途:本試劑盒僅供科研使用,定量檢測(cè)細(xì)胞液,、體液,、組織、血清,、血漿等標(biāo)本小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒操作步驟含量,。

小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒操作步驟     英文名稱:Mouse neutrophil elastase,NE ELISA Kit      檢測(cè)方法:elisa酶聯(lián)免疫分析法ELISA生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),,重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)方法,。其試劑穩(wěn)定、易保存,,操作簡(jiǎn)便,。凡購(gòu)買本公司試劑盒非人為質(zhì)量問題,收貨后十五個(gè)工作日內(nèi)包退換,。 
英文名稱:Mouse neutrophil elastase,NE ELISA Kit      檢測(cè)方法:elisa酶聯(lián)免疫分析法ELISA生物試驗(yàn)是一種敏感性高,,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)
規(guī)格:96T/48T
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等
性狀:盒裝液體
人白介素2受體(IL-2R)Elisa測(cè)定試劑盒用途:科研與實(shí)驗(yàn)試劑,,不得用于臨床診斷,。
標(biāo)本:血清、血漿,、細(xì)胞上清液,、尿液、體液,、灌洗液,、腦脊髓,、心房水,、胸房水、組織等,。
種屬:人,、大鼠、小鼠,、兔子,、豬、犬,、猴,、馬、牛、羊,、雞,、鴨、魚等,。
小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒操作步驟實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制:
1. 儀器與材料:酶標(biāo)儀(使用前預(yù)熱30分鐘),,微量加液器、吸頭,、蒸餾水或去離子水,,濾紙。
2. 緩沖液使用:加5ul 的緩沖液于50ul 的樣品中,,如果樣品量不夠或者不確定,,緩沖液和樣品的混合比例不要小于1:10即可。 混勻,,靜置1小時(shí)備用(如果標(biāo)本是血清或者血漿,,此步驟忽略)。
3. 洗液的配制:按1:100的比例配制洗液備用,。
小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒操作步驟樣品收集,、處理及保存
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液,,以1000×g離心15分鐘,,收集上清。
2. 細(xì)胞:用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104 -106 /ml 左右,,通過反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,,或 者細(xì)胞超聲粉碎,,離心取上清液檢測(cè)。
3. 血清:在室溫下,,血液自然凝固,,以1000×g離心15分鐘,取上清待測(cè),。
4. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,,收集上 清,。
5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,,分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清,。
6. 組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,,稱取重量0.5mg,加入500ul PBS,,用手工或勻漿器,,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,,收集上清進(jìn)行檢測(cè)。
7. 樣品中不能含有NaN3,,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
8. 保存:如果樣品不能立即檢測(cè),,應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,,避免反復(fù)冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。血液標(biāo) 本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解 凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒操作步驟操作步驟:
1. 取出試劑盒,,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘,。
2. 分組:取出 96 孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),,把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 品組(個(gè)濃度)、空白孔,、待測(cè)樣品組,。 注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,,建議設(shè)置復(fù)孔,。
3. 加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,;空白對(duì)照孔加入 50ul 的蒸餾水,;其余微孔中加入 50ul 的待測(cè)樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組,、待測(cè)樣本組各孔中加入 100ul 的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外),。
5. 溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí)。
6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,,靜置 15-30s,,充分清洗酶標(biāo)板 5 次,用吸水紙*拍干,。
7. 顯色:各孔加入顯色劑 A  50ul 后,,再加入顯色劑 B  50ul
8. 終止:25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘,,加入 50ul 終止液,。 9. 讀板:在 450nm 波長(zhǎng)讀取各孔的 OD 值。 
注意事項(xiàng):
1. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,,避免交叉污染,。
2. 加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,,避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過大,,否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響 實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性,。
3. 孵育:嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行,。
4. 反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,如果顏色較深,,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),。
5. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高,,應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,,計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
6. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,試用幾個(gè)標(biāo)本),,如果對(duì)本試劑盒有任何疑問,可和所購(gòu)經(jīng)銷商,, 如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失,。
小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒操作步驟安全性
1. 避免人體直接接觸顯色劑A,、B和終止液。一旦接觸到這些液體,,請(qǐng)盡快用水沖洗,。
2. 實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食、抽煙或使用化妝品,。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

熱帶假絲酵母 Candida tropicalis

小鼠成纖維細(xì)胞英文名稱:L929

運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌 Zymomonas mobilis

HO-8910PM(人高轉(zhuǎn)移卵巢細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

蘇云金芽胞桿菌莫里遜亞種 Bacillus thuringiensis subsp. Morrisoni

粟酒裂殖酵母 Schizosaccharomyces pombe

肝細(xì)胞HBV病毒株英文名稱:HEPG2.2.15

異常漢遜酵母 Hansenula anomala

F9(小鼠畸胎瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

NCI-H520(人肺鱗細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes

植物桿菌 Lactobacillus plantarum

猴菌 Hericium erinaceus

植物桿菌 Lactobacillus plantarum

QBC-939, 人膽管細(xì)胞gersion

松口蘑 Tricholoma matsutake

檸檬串珠菌 Leuconostoc citreum

豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna

玫瑰栗色鏈霉菌 Streptomyces rosecastaneus

MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞

淡紫擬青霉 Paecilomyces lilacinus

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

膠凍樣芽胞桿菌 Bacillus mucilaginosus

小鼠腎小管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL 7(Z),,10(Z),13(Z),,16(Z),,19(Z)-N-(2-hydroxyethyl)-Docosapentaenamide (5 mg)N-(2-hydroxyethyl)-7Z,10Z,,13Z,,16Z,19Z-docosapentaenamide,; 7(Z),,10(Z),13(Z),,16(Z),,19(Z)-N-(2-hydroxyethyl)-Docosapentaenamide

Fusidic Acid (sodium salt) (1 g)(4α,8α,,9β,,13α,14β)-16β-(acetyloxy)- 3α,,11α-dihydroxy-29-nordammara-17Z(20),,24-dien-21-oic acid, monosodium salt,; SQ 16,,36Fusidic Acid (sodium salt)

AM2201 8-quinolinyl carboxamide (5 mg)1-(5-fluoropentyl)-N-(quinolin-8-yl)-1H-indole-3-carboxamide; AM2201 8-quinolinyl carboxamide

PTIO (100 mg)4,,5-dihydro-4,,4,5,,5-tetramethyl-2-phenyl-3-oxide-1H-imidazol-1-yloxy,; α-Phenyltetramethylnitronyl nitroxide; PTIO

Proscillaridin A (10 mg)(3β)-3-[(6-deoxy-α-L-mannopyranosyl)oxy]-14-hydroxy-bufa-4,,20,,22-trienolide; A-32686|NSC 7521|PSC-801,; Proscillaridin A

1,,2-Distearoyl-sn-glycero-3-PC (1 g)1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine,; 1,,2-DSPC|Coatsome MC 8080|1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-Phosphocholine,; 1,,2-Distearoyl-sn-glycero-3-PC

ML-030 (25 mg)3-(2,,5-dimethoxyphenyl)-6-(3,,4-dimethoxyphenyl)-7H-1,,2,4-triazolo[3,,4-b][1,,3,4]thiadiazine,; CID-11757146,; ML-030

FCCP (50 mg)2-[2-[4-(trifluoromethoxy)phenyl]hydrazinylidene]-propanedinitrile; Trifluoromethoxy carbonylcyanide phenylhydrazone,; FCCP

BRM bromodomain Ligand/APC Acceptor Mixture (420 wells)BRM bromodomain Ligand/APC Acceptor Mixture

MN-25-2-methyl derivative (5 mg)7-methoxy-2-methyl-1-[2-(4-morpholinyl)ethyl]-N-[(1S,,2S,4R)-1,,3,,3-trimethylbicyclo[2。2,。1]hept-2-yl]-1H-indole-3-carboxamide,; MN-25-2-methyl derivative

15-epi Prostaglandin A1 (500 ug)15-epi PGA1; 9-oxo-15R-hydroxy-prosta-10,13E-dien-1-oic acid

小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)elisa試劑盒操作步驟6-Bromoisoquinoline (5 g)NSC 229320,; 6-bromo-isoquinoline

HZ52 (25 mg)2-(4-(bipheny-4-ylamino)-6-chloropyrimidiny-2-ylthio)-octanoic acid

(±)11-HEPE (100 ug)(±)-11-hydroxy-5Z,,8Z,12E,,14Z,,17Z-eicosapentaenoic acid; (±)11-HEPE

14(15)-EET (500 ug)(±)14(15)-epoxy-5Z,,8Z,,11Z-eicosatrienoic acid; 14(15)-EpETrE,; 14(15)-EET

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