培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
2.組織來(lái)源：骨髓

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSC）分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi),。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能紅細(xì)胞,、血小板和各種白細(xì)胞,。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細(xì)菌,、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能抗體,。因此,，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長(zhǎng)骨（如肱骨,、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,，稱為紅骨髓,。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔,，隨著年齡增大,，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種除造血干細(xì)胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞,，可以向骨,、軟骨、肌組織,、皮膚,、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化,，因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞,。在骨髓中，BMSC占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%-0.1%,，含量極低,。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求較高，在培養(yǎng)過(guò)程中,，受貼壁時(shí)間,、種植密度、血清含量,、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響,。

5.方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞采用沖洗骨髓、密度梯度離心,、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)CD90免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，最后將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
骨骼肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL  Fluo-3AM( 鈣離子熒光探針 )250μL

黑色素細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL  Fluo-3,，五銨鹽1mg

黑色素細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 不含 TPA5mL  Etoposide( *泊苷 / 鬼臼乙叉苷 )100μL

滑膜細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL  ER-Tracker Red( 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針 )20μL

間充質(zhì)干細(xì)胞成骨細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子5mL  EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞10×100μL
大鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)elisa檢測(cè)試劑盒

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豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)elisa分析檢測(cè)試劑盒

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冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。