產(chǎn)品屬性：

名稱    兔臍帶間充質(zhì)干細胞
2.組織來源：臍帶組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

兔臍帶間充質(zhì)干細胞分離自臍帶,；臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)。原來是由羊膜包卷著卵黃囊和尿膜的柄狀伸長部而形成的,。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,，卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈。當(dāng)卵黃囊及其血管退化,，臍動脈和臍靜脈就發(fā)達起來,，在這些間隙中可以看到疏松的膠狀的間充質(zhì)。在子宮中,，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管,，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2，代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換,。臍動脈將胎兒來的廢物運送至胎盤,，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒。最后由子宮靜脈將來自胎兒的代謝廢物運走,，某種激素和抗體等也通過臍帶從母體移交給胎兒,。臍帶中含有大量的干細胞，干細胞是生命的種子,，它會分化成機體的各種細胞,，結(jié)出各種不同的果實——血液細胞、神經(jīng)細胞,、骨骼細胞等,。干細胞是具有自我更新、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體,；這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數(shù)量,，又可進一步分化為各種組織細胞，從而在組織修復(fù)等方面發(fā)揮積極作用,。間充質(zhì)干細胞（MSC）是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞,。在不同的誘導(dǎo)條件下，可分化為多種造血細胞以外的組織細胞,，并具有造血支持,、免疫調(diào)節(jié)、組織修復(fù)等作用,；目前,，多用于風(fēng)濕免疫疾病的治療。間充質(zhì)干細胞（MSCs）是一種具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞,，存在于骨髓,、脂肪組織、臍血及多種胎兒組織,。它可分泌多種細胞因子及生長因子,，促進造血干細胞（HSC）的增殖與分化,。MSCs還具有免疫調(diào)節(jié),、抗炎和組織修復(fù)作用，可減輕移植物抗宿主?。?/span>GVHD）及其他移植相關(guān)并發(fā)癥,。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的兔臍帶間充質(zhì)干細胞采用組織貼塊法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的兔臍帶間充質(zhì)干細胞經(jīng)CD90免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，最后將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5,、PBS沖洗細胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；
6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
尖鱗黃傘   白色念珠菌凍干粉

枯草芽孢桿菌枯草亞種   豬霍亂沙門氏菌豬霍亂亞種

枯草芽孢桿菌CMCC63501凍干粉   空腸彎曲桿菌

卡爾斯伯酵母   惡臭醋酸桿菌混濁變種

銅綠假單胞菌   銀絲菇,、絲蓋小包腳菇
大鼠緊密連接蛋白(Ocln)elisa檢測試劑盒

大鼠金屬轉(zhuǎn)運蛋白1(MTP1)elisa檢測試劑盒

大鼠金屬硫蛋白2(MT-2)elisa檢測試劑盒

大鼠金屬硫蛋白(MT)elisa檢測試劑盒

大鼠解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)elisa檢測試劑盒
兔臍帶間充質(zhì)干細胞人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)elisa分析檢測試劑盒

人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)elisa檢測試劑盒

人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)elisa分析檢測試劑盒

人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)elisa檢測試劑盒

人Ⅰ型前膠原氨基端肽（PINP）elisa檢測試劑盒