產(chǎn)品屬性：

名稱    兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞
2.組織來源：脊髓組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞分離自脊髓組織；脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu)，位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù),；是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息,。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息,。人和脊椎動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面,，上端連接延髓,，兩旁發(fā)出成對(duì)的神經(jīng)，分布到四肢,、體壁和內(nèi)臟,。脊髓的內(nèi)部有一個(gè)H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū)，主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成,；在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),，主要由有髓神經(jīng)纖維組成；脊髓是許多簡(jiǎn)單反射的中樞,。脊髓兩旁發(fā)出許多成對(duì)的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚,、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路,，也是許多簡(jiǎn)單反射活動(dòng)的低級(jí)中樞,。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié)，31對(duì)脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的,。神經(jīng)系統(tǒng)基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元,，即神經(jīng)細(xì)胞，其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大,。但都具有胞體和樹突,、軸突,。胞體又叫核周體，內(nèi)含神經(jīng)絲,、微管,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個(gè)有明顯核仁的核,。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示,，在光鏡下是灰藍(lán)色斑塊狀，稱為尼氏小體,。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起,，能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動(dòng)，突起的大小和形態(tài)各不相同,，很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別,。脊髓組織內(nèi)含有大量膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)元含量少,，分離純化難度大,，且脊髓神經(jīng)元細(xì)胞是高度分化的終末細(xì)胞，不能分裂增殖,，培養(yǎng)要求高,。剛接種的脊髓神經(jīng)元呈圓形，體積小,，透亮,，無突起。培養(yǎng)2-3d,，可見胞體增大,，突起增多延長(zhǎng)；培養(yǎng)6-7d,，細(xì)胞體大飽滿,，突起明顯增加延長(zhǎng)并交織成網(wǎng)，光暈明顯,，立體感強(qiáng),。培養(yǎng)20d后，死亡細(xì)胞明顯增加,，細(xì)胞出現(xiàn)內(nèi)空泡,，突起粗細(xì)不均，甚至脫壁,，發(fā)生細(xì)胞崩解,。

5.方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞采用膠原酶&聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大,，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí),。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
凍干粉   多頭被孢

食酸菌   小被孢霉

蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae   深黃被孢霉

頂青霉   流感嗜血桿菌ATCC49247凍干粉

平蓋靈芝（樹舌）   綠膿假單胞菌(綠膿桿菌)
大鼠蘭尼定受體1(RYR1)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠賴氨酰氧化酶樣蛋白2(LOXL2)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠醌NADH脫氫酶1(NQO1)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠跨膜蛋白27(TMEM27)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠克拉拉細(xì)胞蛋白16(CC16)elisa檢測(cè)試劑盒
兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞人EB病毒核抗原1(EBNA1)抗體(IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人EB病毒核抗原1(EBNA1)抗體(IgG)elisa檢測(cè)試劑盒

人EB病毒核抗原3A抗體(IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒

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