冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。

產品屬性：

名稱    大鼠前列腺上皮細胞
2.組織來源：前列腺

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠前列腺上皮細胞分離自前列腺組織；前列腺（Prostate）是雄性*的性腺器官,；前列腺是不成對的實質性器宮,，由腺組織和肌組織構成。前列腺如栗子,，底朝上,，與膀胱相貼，尖朝下,，抵泌尿生殖膈,，前面貼恥骨聯(lián)合，后面依直腸,。前列腺腺體的中間有尿道穿過,，扼守著尿道上口，所以,，前列腺有問題時,，排尿首先受影響。前列腺是機體非常少有的,，具有內、外雙重分泌功能的性分泌腺。作為外分泌腺,，前列腺每天分泌前列腺液,，是構成精液主要成分；作為內分泌腺,，前列腺分泌的激素稱為“前列腺素",。前列腺上皮細胞與前列腺的功能關系密切，上皮細胞的損傷是前列腺炎的主要病癥,，重度的前列腺炎患者的前列腺液內可檢測到脫落的上皮細胞,，這是上皮細胞損傷的標志。炎癥發(fā)生時,，與炎癥相關的一些炎癥因子可能發(fā)生變化,。因此，體外培養(yǎng)前列腺上皮細胞是研究前列腺炎及前列腺上皮肉瘤等疾病的前提和基礎,。前列腺主要特征如下：①前列腺結構和功能活動均受雄性激素的調控,；②基底細胞主要表達高分子量細胞角蛋白（CK-5、CK-14）,，基底上皮細胞可分化成管腔上皮細胞,；③前列腺上皮細胞的培養(yǎng)為研究前列腺的許多重要特性以及化學和激素性致癌作用提供了機會。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠前列腺上皮細胞采用先中性蛋白酶消化,、后膠原酶-聯(lián)合消化并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠前列腺上皮細胞經PCK免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
抗利尿激素/血管升壓素/加壓素/血管加壓素抗體

ATP結合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體

激素受體相關蛋白16抗體

β淀粉樣肽1-40 C端/Aβ1-40 C端抗體

含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族13抗體
大鼠鈉/葡萄糖協(xié)同轉運蛋白2(SGLT2)elisa檢測試劑盒

大鼠鈉/鉀離子轉運ATP酶β4肽(ATP1β4)elisa檢測試劑盒

大鼠鈉/鉀離子轉運ATP酶β3肽(ATP1β3)elisa檢測試劑盒

大鼠鈉/鉀離子轉運ATP酶β1肽(ATP1β1)elisa檢測試劑盒

大鼠鈉/鉀離子轉運ATP酶α1肽(ATP1α1)elisa檢測試劑盒
大鼠前列腺上皮細胞人N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-(AcSDKP)elisa分析檢測試劑盒

人N-乙?；?/span>-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-(AcSDKP)elisa檢測試劑盒免費代測

人OJ抗體/抗異亮氨酰tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)elisa分析檢測試劑盒

人OJ抗體/抗異亮氨酰tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)elisa檢測試劑盒

人OX40配體（OX40L）elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。