名稱    大鼠輸尿管上皮細(xì)胞
2.組織來源：尿道組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

大鼠輸尿管上皮細(xì)胞分離自輸尿管組織,；輸尿管上接腎盂,，下連膀胱，是一對細(xì)長的管道,，呈扁圓柱狀,，位于腹膜后，為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu),，沿腰大肌內(nèi)側(cè)的前方垂直下降進(jìn)入骨盆,。輸尿管有三個(gè)狹窄部：一個(gè)在腎盂與輸尿管移行處（輸尿管起始處）；一個(gè)在越過小骨盆入口處,；后一個(gè)在進(jìn)入膀胱壁的內(nèi)部,。這些狹窄是結(jié)石、及壞死組織容易停留的部位,。輸尿管——膀胱連接處有一種特殊結(jié)構(gòu),，即瓦耳代爾鞘，它能有效地防止膀胱內(nèi)尿液返流到輸尿管,。臨床上將輸尿管分為上,、中、下三段,，也可稱為腹段,、盆段、膀胱段,。其中,，腹段自腎盂輸尿管交界處，到跨越髂動(dòng)脈處,；盆段,，自髂動(dòng)脈到膀胱壁；膀胱段,，自膀胱壁內(nèi)斜行至膀胱粘膜,、輸尿管開口。輸尿管管壁分為4層,，黏膜層,、固有層、肌層,、外膜,。黏膜層表面為移行上皮，約有4-5層細(xì)胞,；固有層由細(xì)密的結(jié)締組織構(gòu)成,，內(nèi)含膠原纖維和少量彈性纖維；輸尿管肌層主要由內(nèi)縱和外環(huán)兩層平滑肌組成,；外膜為疏松結(jié)締組織,，營養(yǎng)血管由外膜進(jìn)入輸尿管。其中,，輸尿管上皮細(xì)胞主要分布于黏膜層,。

5.方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠輸尿管上皮細(xì)胞采用先消化、然后機(jī)械分離法使輸尿管分層,、后膠原酶消化,，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠輸尿管上皮細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
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細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,，并可長時(shí)間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài),、結(jié)構(gòu),、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí),，可以施加化學(xué),、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下,。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,，需要時(shí),，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué),、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

使用方法：
收到細(xì)胞后,，請按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒,，拆下封口膜,，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化,；
3) 用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,，放入37℃,，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞*貼壁后,，培養(yǎng)觀察,。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO,，貨號21875-091),，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%,。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,，液氮儲存,。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM,，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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